细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中造成异常结果的原因和解决方法

科德角国际生物医学科技（北京）有限公司

凝胶法实验过程时间短，消耗样品量少，且具有使用设备简单，费用低等优点，作为《中国药典》“仲裁"检查方法，广泛用于注射剂药品细菌内毒素检查。

1.干扰试验的必要性

鲎试剂凝集反应是一种二价阳离子酶反应体系，有许多干扰反应的物质会干扰凝胶的形成。在新样品测定中，必须首先进行细菌内毒素干扰试验，确定是否存在干扰样品出现缩合反应的因素。为了保证所选处理方案能够在不灭活内毒素情况下有效消除干扰，采用预先添加的标准内毒素再处理液进行干扰试验。

2.可能会出现的异常结果及其原因和解决方法

2.1造成呈假阴性的可能原因及解决方法

原因可能是：①内毒素工作标准中存在的一些问题，如滴度标注不准确，过期或贮存不当导致失效，稀释误差或稀释振荡不够，对照管没有达到2λ阳性内毒素浓度；②问题出在鲎试剂。例如，过期失效，振荡不当，灵敏度标注不准确，会产生气泡，鲎试剂酶蛋白变性，鲎试剂破坏；③温控器温度不符合要求或保温时间不够。

解决办法包括：规范内毒素标准效价的审查和鲎试剂在保质期正确储存和使用的敏感性；内毒素稀释应准确，确保PC管添加2λ内毒素；当使用可溶解的鲎试剂时，沿着管壁慢慢加水，让混合器振荡30s。避免剧烈振动产生气泡，确保恒温器温度和保温时间正确。

2.2造成假阳性的可能原因及解决方法

原因可能包括：实验设备受到污染，经热原、外源性内毒素或微生物污染不能完全灭活；试验中由于误操作造成的内毒素污染；BET水不符合要求，内毒素超标，培养温度不正确等。解决方案包括：按照2015年版《中国药典》的规定对实验仪器进行处理；选择合格的BET水，确保正确的培养温度、时间和操作。

总而言之，细菌内毒素检查法已被列入许多国家药典。方法学研究表明，用细菌内毒素法取代家兔热原法的药物种类较多，因为它比家兔热原法更精准、快速、简捷、经济、容易推广等诸多优点。

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