国内人血浆内毒素检测的实验操作方法

科德角国际生物医学科技（北京）有限公司

一、样品的前处理

1、取0.5ml人血浆（S），按如下方法稀释：0. 5mlS+0.5mID+1.5mlW→2.5mlS5

式中：D为专用的稀释剂；W为专用的细菌内毒素检测（BET）用水；S5为稀释了5倍的血浆，下标数字表示稀释倍数。

2、把装有S5的小瓶置70℃的水浴中10分钟。

3、把经加热处理的装有S5的小瓶用3000rpm离心10分钟，然后吸取上清液（仍记为S5）作 BET。

4、如果不立即作BET，可把经离心的装有S5的小瓶置2 ~3℃冰箱保存，可在3天内作BET。

二、稀释标准内毒素

1、取效价为10Eu的标准内毒素（CSE）一支，开启，加入0. 1mlW溶解，然后用封口膜封闭瓶口。

2、把装CSE的安瓿放在旋涡混合器上强烈混合10分钟得到浓度为10Eu/ml的CSE溶液，记为E10（E表示CSE，下标数字表示浓度）。

3、按下图步骤制备CSE浓度系列：

以上均需在旋涡混合器混合。

如下图所示：

四、取鲎试剂（TAL）一支，按标示装量加W复溶

五、试管设置与加样

在电脑的“检测”程序上按下述方法设置反应试管，并取反应试管按下表要求加样：

六、检测

把加好样的试管按编号顺序插入检测仪器的反应孔中反应，每支试管在插入反应孔前应轻轻晃动摇匀试管中的内容物。

七、结果处理

1、反应的数据采集、处理、结果表达等均由检测仪自动完成。

2、日常的检测只需要设置编号1，2，9，10，11，12号的反应试管，利用储存的标准曲线即可。

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