几种血液中内毒素的前处理测定方法

科德角国际生物医学科技（北京）有限公司

2022/12/05 16:08

（1）氯仿提取法：测定方法如下：

（2）稀释加热法：即水稀释加热法作为简便的前处理方法被普遍采用，由于稀释倍数，加热温度和时间不同，结果也不完全相同，其中主要方法见表6。

在这些方法中由于不确定因素太多，因此值得探索的地方很多。为了克服稀释加热法的缺陷，避免浊度生成，人们开发出了使用表面活性剂（0.04% TritonX -100）稀释，80℃5分钟加热处理方法。这个前处理方法，能得到很好的血浆内毒素回收率。减少非特异性浊度所引起的假阳性反应。尤其是日本和光纯药的Toxinonuter ET201采用比浊时间分析法检测，能得到很好的实验结果。

（3）高氯酸法（PCA）与新高氯酸法（New PCA）：所谓高氯酸法（PCA），即血浆加高氯酸后，产生的变性沉淀物用离心法除去，用上清液进行比色测定。后来人们又发现这些沉淀物中含有内毒素活性物质，因而对变性的血浆蛋白不进行沉淀，而进行现溶解处理，这就是新高氯酸法（New PCA），一般新高氯酸法的测定结果要比高氯酸法高8~10倍。

一般高氯酸法只测定血中游离的内毒素，而新高氯酸法可以将游离内毒素和蛋白结合内毒素一起测定出来。也就是说，新高氯酸的测定值减去高氯酸法的测定值，就等于结合型内毒素的量；我们可以同时使用两种方法检测以查明内毒素与蛋白的结合情况，并且可以对病人的病情发展进行分析。具体测定方法如下所示：

另外，在我们对血浆中的内毒素和鲎试验法检测时，前处理加热对血浆中和水中内毒素影响要有一个认识。细菌内毒素在人体内的分布往往以两种方式存在，一种为游离型，另外一种为蛋白结合型。我们知道，细菌内毒素在水中存在时对加热是十分敏感的，而在血中的情况又是怎样的？人们通过实验发现：血浆中的内毒素在经过100℃加热1分钟或10分钟，其标准曲线没有出现明显的差别。而水中的内毒素经1分钟加热后，其标准曲线趋向平坦，10分钟加热后，接近水平。这可能是脂多糖分子在水中加热后出现集结的原故。而在血浆的内毒素则不同，团块的形成会受到血小板的抑制，内毒素可与多种血液成分结合，如血小板﹑抗体、粘性蛋白等，这些物质可能保护血浆内毒素与LAL发生反应。因此这就是加热血浆也不会破坏其内毒素的原因。

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