人类CD14与脂多糖的结合域位于CD14N端的151个氨基酸上,因为含有该序列氨基酸修剪(truncation)的CD14足以引起完全的生物学反应,之后研究者进一步发现,N端的65个氨基酸是CD14结合脂多糖及信号传递的关键区域。为了更精确定位CD14分子的结合位点,研究者采用基因突变等方法,使个别氨基酸的密码子发生变异。
Stelter等在N端的152氨基酸区域内用丙氨酸取代而获得一系列的CD14突变体,23种突变体蛋白质中有21种能稳定地表达在转染的CHO细胞表面,其中20种在血浆中对LBP以依赖性的方式结合脂多糖,只有一种突变体(Ala39-Ala41,Ala43,Ala44)CD14不能与脂多糖或大肠杆菌发生特异性的相互作用,也不能引发由脂多糖启动的NF-eB的核移位,且这种突变体的CD14不与CD14单克隆抗体My4发生反应。抗CD14单克隆抗体My4具有广泛的种属间交叉反应性,与人、牛、猪、兔及豚鼠的单核细胞的CD14均能反应,说明My4只能够识别CD14中非常保守的表位。
上述结果显示,N端39~44残基是人类CD14与脂多糖结合位点的最基本部分。Shapiro等在CD14分子的N端合成有5个氨基酸相互重叠,长度为15个氨基酸的多肽,其中包括含上述区域氨基酸的15肽能够抑制脂多糖与sCD14的结合。
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