方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 治疗类生物药品 |
检测项目 | 含量测定>色谱法 |
参考标准 | . |
含有弱阳离子交换固定相的色谱柱用于分离带正电的蛋白质时呈现出一定的多功能性。特 别值得注意的是,通过调整流动相的 pH 可以实现样品选择性的差异。我们探讨了这些值得 注意的参数,以及如何通过改变这些参数来优化目标化合物的分离。这些工作使用了安 捷伦 Bio WCX 色谱柱,安捷伦 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液 顾问软件。
复杂生物分子,例如蛋白质含有大量的氨基酸并带有酸性和碱性侧链官能团(包括他们 的 N 和 C 端)。这些残基的强度多数都较弱,因此分子所带的净电荷取决于周围环境的 pH。 与常规的强阳离子交换吸附剂(一般带有磺丙基官能团,能够在常规 pH 2-12 的操作范围 内保持带负电状态)不同,弱阳离子交换色谱柱带有羧基官能团。这就意味着其电离水 平在中等 pH(pH 4-6)下可能会改变,并且可能还受到离子强度的影响(如图 1 所示)。
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