使用配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μ 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四 元液相色谱系统m

2022/11/25   下载量： 0 次

方案摘要

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应用领域 制药/生物制药
检测样本 治疗类生物药品
检测项目 特殊物质和基团
参考标准 .

本应用简报证实，使用配备新型 HILIC 色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪，可对人免疫球蛋白 G 的 N-连接糖链进行灵敏、重现的分析。对人 IgG N-连接糖链文库分析的保留时间和峰面积精度进行测定。此外，对于具有低检测限和低定量限的五种糖链标准品（M5、A2G2、A2G2S1、FA2G2S1 和 A2G2S2）混合物，在 0.016-1 pmol 的范围内具有良好的线性。配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μm 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪是一款出色的系统，可实现灵敏且重现的2-AB 衍生人免疫球蛋白 G 释放 N-连接糖链分析。

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配置单
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抗体代表一大类重组的治疗性蛋白 质，是一种主要的药物类别。此类 治疗性药物的疗效高度依赖于正确 的糖基化模式。目前，获批的所有治 疗性单克隆抗体 (mAb) 均为免疫球蛋 白 G (IgG)1 。对其糖基化模式的分析 是 QA/QC 流程中一个重要的环节。此 外，来自血浆的人 IgG 的糖基化模式 可以反映患者的健康或疾病状态2 。 人 IgG 中有一个单独的保守 N-连接糖 基化位点，位于每条重链 Fc 段的 Asn297 处3 。因此每个 IgG 可连接具有高 异质性的两个糖基，并可产生含至少 30 种糖型的混合物1 。来自血浆的人 IgG N-连接糖链主要为二分支复合型 结构，主要由零至两个半乳糖残基以 及一至两个唾液酸进行核心岩藻糖基 化。此外，人 IgG 携带少量的二分支 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc) 残基。一 般来说，重组产生的 mAb 具有稍简单 的模式，不具有非岩藻糖基化或二分 支 GlcNAc 糖链结构4 。 这种 mAb 中还发现了甘露糖-5 等其他 更不成熟的高甘露糖结构，大多数量 较少5 。 由于复杂生物样品的糖基化分析得到 的丰度通常很低，因此蛋白质糖基化 模式的分析极具挑战性。使用亲水相 互作用液相色谱 (HILIC) 联用带荧光检 测器的 HPLC 分离 AB 标记的糖链结 构，是一种可靠且灵敏的糖基化分析 方法6 。本应用简报使用这种方法来测 定精度、线性和灵敏度。

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天津市普伦科技开发有限公司
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