方案摘要
方案下载应用领域 | 医疗/卫生 |
检测样本 | 全血/血清/血浆 |
检测项目 | |
参考标准 | / |
急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一种由胰腺自身消化引起的局部或者全身性的炎症反应。据统计,全球AP发病率为每 10 万人 33.74 例,死亡率为每 10 万人 1.60 例。AP的严重程度从轻到重不等,约15 - 25%的AP患者会发展为中度或重度,并伴有系统性炎症和多器官衰竭的风险,这类患者占AP死亡人数的大部分。然而,目前临床上用于AP的诊断方法并不能提供明确的AP严重程度分级,此外,当前AP严重评估方案的局限性给AP的临床诊断、治疗和预后都带来巨大的挑战。因此,开发具有可靠生物标志物的 AP 快速检测方法,尤其是能够精确诊断 AP 并对其严重程度进行分级的非侵入性的诊断标志物,对于改善当前AP快速诊断和病程分级方法的局限性来讲至关重要。汇芯生物全自动外泌体提取系统EXODUS应用于通过从血浆中分离外泌体进行重症胰腺炎的识别和诊断(RAPIDX),EXODUS可以成为从微量的样本中快速分离出外泌体的关键利器,助力急性胰腺炎快速诊断和分级。
在进行蛋白质组学分析之前,作者根据国际细胞外囊泡学会(ISEV)的指导原则,通过NTA、 WB和TEM对通过EXODUS分离的血浆EV进行了评估。结果显示,分离得到的血浆EV粒径分布在30-200nm尺寸范围内,峰值在105 nm;WB分析结果显示,分离后的产物能表达经典的EV蛋白: Flot-1, CD9,Mac-2BP;TEM结果显示,血浆EV呈现典型的茶托状。后续采用自下而上的策略基于无标记的LC-MS/MS进行EV蛋白质组学,并使用MALDI-TOF MS检测完整EV的指纹,以检测和明确潜在的AP诊断和分级的生物标志物。
通过自下而上的蛋白质组学已经确定了4个候选标志物,接着将结合自上而下的蛋白质组学分析,以达到两种方法相互验证、相互补充和更加全面地解析与AP发生和进展密切相关的关键EV蛋白的目的。通过EXODUS设备快速分离得到HC组、MAP组、SAP组的血浆EV,再通过MALDI-TOF快速、高通量地获取三类人群的完整EV的蛋白指纹图谱。从蛋白指纹图谱的差异峰中可以选择能反映AP发生和进展的差异峰作为潜在生物标志物。分析发现 SAA 蛋白及其亚类(SAA1-1、desR-SAA1-2、SAA2、SAA1-2) 在快速诊断 AP 的性能上 AUC 高达 0.92 - 0.97。进一步运用了免疫电镜技术交叉验证SAA在EV表面的表达。研究结果显示,抗SAA抗体(包括SAA1和SAA2)标记的10 nm金颗粒更倾向于出现在AP患者的EV表面,而不是HC个体EV表面。因此,基于EXODUS快速分离血浆EV和基于MALDI-TOF快速检测血浆EV蛋白的方法是探究血浆EV蛋白在AP发生时身体机能变化的关键利器。通过SAA在血浆EV中表达水平的变化,可以实现AP的精确诊断。
EXODUS分离泪液外泌体用于眼部疾病和系统性疾病的生物标志物的发现
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