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接触霉变玉米后女子肺部长满黄曲霉菌,毒性极强的黄曲霉毒素该如何鉴别?

12月8日早间,“女子接触霉变玉米后肺部长满真菌”冲上热搜第一。据人民网,一23岁女子前段时间回老家帮忙收玉米,事后连续1个多月咳喘不止。经医生检查,她的肺部长满了黄曲霉菌,引发了真菌感染。该女子回忆,当时她在无防护措施情况下收玉米,有些玉米可能淋雨霉坏。[1]

什么是黄曲霉毒素?

黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物。当粮食未能及时晒干及储藏不当时,往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素。在各类食品中,花生、花生油、玉米污染最严重。黄曲霉毒素是一种剧毒的致肝癌物质,人摄入大剂量的黄曲霉毒素后可出现肝实质细胞坏死、胆管上皮细胞增生、肝脂肪浸润及肝出血等急性病变。


事实上,世界范围内有多次黄曲霉毒素急性中毒事件,非洲的霉木薯饼中毒,印度的霉玉米中毒,肯尼亚黄曲霉玉米污染事件……所以把食物中的黄曲霉毒素控制在安全值以内,也是各国都在严格把关不敢松懈的事儿。[2]



怎么鉴别食物中是否黄曲霉素超标?

首先是快速识别,黄曲霉素是很苦的,食用花生、核桃等食物时如果感觉很苦,马上吐出来,并漱口。


此外,睿科集团建立了Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪测定玉米、大米和花生油中黄曲霉毒素B族和G族的分析方法,供广大食品检测客户参考。试样经过70%甲醇水溶液提取,提取液经离心、稀释后用含有黄曲霉素特异抗体的免疫亲和柱自动净化。用20mL水淋洗柱子将免疫亲和柱上的杂质除去,以甲醇洗脱免疫亲和柱。将洗脱液在50℃条件下氮吹干,用1mL初始流动相定容,经高效液相色谱仪上机分析。

图-1.4种黄曲霉毒素的结构式

下文参考GB5009.22-2016《食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》中第三法,采用免疫亲和柱净化,高效液相色谱检测,建立了复杂粮油样品基质中黄曲霉毒素高灵敏度的前处理和分析方法,得到四种常见粮油样品中黄曲霉毒素的加标回收率在83-100%之间,RSD值小于5%。

1.标准曲线配置

使用睿科Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站可实现标准品的全自动化配置,可将购买的混合标液(1000ug/L)通过工作站的直接稀释模式,配置成浓度为10ug/L的工作中间液,紧接着可通过程序设置,吸取该工作液,配置一条浓度分别为0.5ug/L,2.0ug/L,5.0ug/L,25ug/L和100ug/L的标准工作曲线。

图-2. Auto Prep 200 液体工作站配标程序

2.样品提取与前处理

花生油样品前处理

准确称取5g花生油样品于50mL离心管中,加入20mL甲醇-水溶液(7:3)(v/v),涡旋震荡提取20min,以7000r/min的转速离心5min,取4mL上清液于80mL玻璃上样管中,加入23mL 0.1%吐温-20的PBS缓冲液混匀,待用。

(此处以花生油样品前处理为例,玉米粉、大米样品操作步骤同上)


固相萃取净化条件

全自动固相萃取仪
Fotector Plus
固相萃取柱
黄曲霉毒素免疫亲和柱
(Romer,60 mg/3 mL)
淋洗
超纯水
洗脱
甲醇

表-1 固相萃取净化条件

以2mL/min的速度精确上样27 mL待测液,10mL水润洗样品瓶,10mL水淋洗免疫亲和柱,气推30mL吹干免疫亲和柱,推速为80mL/min。最后用2mL甲醇以0.5mL/min的速度洗脱样品,收集洗脱液用睿科Auto EVA-60全自动平行浓缩仪于50°C、2psi条件下氮吹干,用初始流动相定容至1mL,过滤膜上机分析。详细步骤见图-3。

图-3. Fotector Plus 黄曲霉毒素免疫亲和净化方法

3.样品测试

油样加标测试

取空白花生油样5g,添加2ug/kg的黄曲霉毒素G2、B2、G1和B1的标准品,进行上述步骤的前处理净化,样品回收率如下表-2所示:

表-2添加水平为2ug/kg花生油样的回收率

大米样品加标测试

大米中添加水平为2ug/kg的黄曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率结果:

表-3添加水平为2ug/kg大米的回收率结果

玉米样品加标测试

玉米中添加水平为2ug/kg的黄曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率结果:

表-4添加水平为2ug/kg玉米的回收率结果

4.注意事项

由于黄曲霉毒素在紫外光照射下不稳定,因此在实验过程中应该避免紫外光和太阳光的照射。

谷物中离心完成后,不可放置过长时间,否则谷物容易重新吸水,可能导致提取液的浓度过高,使样品的回收率偏高,影响测试结果。

固相萃取进行提取液净化前,特别对于偏酸或偏碱性样品,应用PBS缓冲溶液(pH=7.4)进行稀释后上机,否则可能会导致回收率偏低。

5.总结

标液配制

净化

浓缩


本文采用Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站可实现混标、标准曲线的配置,全程无需人为值守,让实验人员远离有毒有害特别是黄曲霉毒素这样的剧毒化学物质,保护身体健康。

Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪能同步净化6个样品,连续自动处理60个样品,做样通量高;同时可无人值守,减少工作量。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差,以及将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。

Auto EVA-60全自动平行浓缩仪处理通量高,60个样品可同时进行氮吹,实验平行性好;采用氮吹针自动追随液面的设计,无需手动调节氮吹针且耗气量小,省时省力。

本解决方案快速高效,且无需人员值守,让实验人员远离黄曲霉毒素等有害化学物质且提供工作效率。

参考资料:

[1]《热搜第一!女子接触霉变玉米后肺部长满黄曲霉菌,什么是黄曲霉毒素,它有哪些危害?》人民网人民数据

[2]《“食药安全 科学生活”食品篇之黄曲霉毒素的前世今生》广州市黄埔区人民政府


来源于:睿科集团股份有限公司

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12月8日早间,“女子接触霉变玉米后肺部长满真菌”冲上热搜第一。据人民网,一23岁女子前段时间回老家帮忙收玉米,事后连续1个多月咳喘不止。经医生检查,她的肺部长满了黄曲霉菌,引发了真菌感染。该女子回忆,当时她在无防护措施情况下收玉米,有些玉米可能淋雨霉坏。[1]

什么是黄曲霉毒素?

黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物。当粮食未能及时晒干及储藏不当时,往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素。在各类食品中,花生、花生油、玉米污染最严重。黄曲霉毒素是一种剧毒的致肝癌物质,人摄入大剂量的黄曲霉毒素后可出现肝实质细胞坏死、胆管上皮细胞增生、肝脂肪浸润及肝出血等急性病变。


事实上,世界范围内有多次黄曲霉毒素急性中毒事件,非洲的霉木薯饼中毒,印度的霉玉米中毒,肯尼亚黄曲霉玉米污染事件……所以把食物中的黄曲霉毒素控制在安全值以内,也是各国都在严格把关不敢松懈的事儿。[2]



怎么鉴别食物中是否黄曲霉素超标?

首先是快速识别,黄曲霉素是很苦的,食用花生、核桃等食物时如果感觉很苦,马上吐出来,并漱口。


此外,睿科集团建立了Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪测定玉米、大米和花生油中黄曲霉毒素B族和G族的分析方法,供广大食品检测客户参考。试样经过70%甲醇水溶液提取,提取液经离心、稀释后用含有黄曲霉素特异抗体的免疫亲和柱自动净化。用20mL水淋洗柱子将免疫亲和柱上的杂质除去,以甲醇洗脱免疫亲和柱。将洗脱液在50℃条件下氮吹干,用1mL初始流动相定容,经高效液相色谱仪上机分析。

图-1.4种黄曲霉毒素的结构式

下文参考GB5009.22-2016《食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》中第三法,采用免疫亲和柱净化,高效液相色谱检测,建立了复杂粮油样品基质中黄曲霉毒素高灵敏度的前处理和分析方法,得到四种常见粮油样品中黄曲霉毒素的加标回收率在83-100%之间,RSD值小于5%。

1.标准曲线配置

使用睿科Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站可实现标准品的全自动化配置,可将购买的混合标液(1000ug/L)通过工作站的直接稀释模式,配置成浓度为10ug/L的工作中间液,紧接着可通过程序设置,吸取该工作液,配置一条浓度分别为0.5ug/L,2.0ug/L,5.0ug/L,25ug/L和100ug/L的标准工作曲线。

图-2. Auto Prep 200 液体工作站配标程序

2.样品提取与前处理

花生油样品前处理

准确称取5g花生油样品于50mL离心管中,加入20mL甲醇-水溶液(7:3)(v/v),涡旋震荡提取20min,以7000r/min的转速离心5min,取4mL上清液于80mL玻璃上样管中,加入23mL 0.1%吐温-20的PBS缓冲液混匀,待用。

(此处以花生油样品前处理为例,玉米粉、大米样品操作步骤同上)


固相萃取净化条件

全自动固相萃取仪
Fotector Plus
固相萃取柱
黄曲霉毒素免疫亲和柱
(Romer,60 mg/3 mL)
淋洗
超纯水
洗脱
甲醇

表-1 固相萃取净化条件

以2mL/min的速度精确上样27 mL待测液,10mL水润洗样品瓶,10mL水淋洗免疫亲和柱,气推30mL吹干免疫亲和柱,推速为80mL/min。最后用2mL甲醇以0.5mL/min的速度洗脱样品,收集洗脱液用睿科Auto EVA-60全自动平行浓缩仪于50°C、2psi条件下氮吹干,用初始流动相定容至1mL,过滤膜上机分析。详细步骤见图-3。

图-3. Fotector Plus 黄曲霉毒素免疫亲和净化方法

3.样品测试

油样加标测试

取空白花生油样5g,添加2ug/kg的黄曲霉毒素G2、B2、G1和B1的标准品,进行上述步骤的前处理净化,样品回收率如下表-2所示:

表-2添加水平为2ug/kg花生油样的回收率

大米样品加标测试

大米中添加水平为2ug/kg的黄曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率结果:

表-3添加水平为2ug/kg大米的回收率结果

玉米样品加标测试

玉米中添加水平为2ug/kg的黄曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率结果:

表-4添加水平为2ug/kg玉米的回收率结果

4.注意事项

由于黄曲霉毒素在紫外光照射下不稳定,因此在实验过程中应该避免紫外光和太阳光的照射。

谷物中离心完成后,不可放置过长时间,否则谷物容易重新吸水,可能导致提取液的浓度过高,使样品的回收率偏高,影响测试结果。

固相萃取进行提取液净化前,特别对于偏酸或偏碱性样品,应用PBS缓冲溶液(pH=7.4)进行稀释后上机,否则可能会导致回收率偏低。

5.总结

标液配制

净化

浓缩


本文采用Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站可实现混标、标准曲线的配置,全程无需人为值守,让实验人员远离有毒有害特别是黄曲霉毒素这样的剧毒化学物质,保护身体健康。

Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪能同步净化6个样品,连续自动处理60个样品,做样通量高;同时可无人值守,减少工作量。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差,以及将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。

Auto EVA-60全自动平行浓缩仪处理通量高,60个样品可同时进行氮吹,实验平行性好;采用氮吹针自动追随液面的设计,无需手动调节氮吹针且耗气量小,省时省力。

本解决方案快速高效,且无需人员值守,让实验人员远离黄曲霉毒素等有害化学物质且提供工作效率。

参考资料:

[1]《热搜第一!女子接触霉变玉米后肺部长满黄曲霉菌,什么是黄曲霉毒素,它有哪些危害?》人民网人民数据

[2]《“食药安全 科学生活”食品篇之黄曲霉毒素的前世今生》广州市黄埔区人民政府