基于HTRF方法的新药研发检测技术优化
什么是HTRF?
均相时间分辨荧光（HTRF, Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）是⽤来检测纯液相体系中待测物的⼀种常⽤⽅法。它提供了一种简单、免洗的方法，可在短短两个小时内检出靶蛋白并对其进行量化分析。它将荧光共振能量转移（FRET）和时间分辨测量的优点相结合，可消除短暂的背景荧光，成为分析方法学开发应用中的理想选择。
在FRET实验中，生物分子（如蛋白等）被荧光基团供受体标记。当生物分子之间相互作用，供受体荧光基团的距离被拉近。此时，若供体被激发，它会传递它的发射光能量给受体。受体和供体的发射光具有不同的波长，可以被微孔板读板机区分，从而定量生物分子之间的相互作用。
使用镧系元素荧光基团作为供体，发射光有很长的半衰期，HTRF可以利用时间分辨检测荧光，消除短半衰期背景荧光的干扰。在HTRF实验中，由于供体荧光基团发射光有较长半衰期，供受体荧光基团的激发和发射都可以在短半衰期背景荧光消失后再检测。典型的HTRF检测把铕穴状化合物用作供体，有机荧光团d2用作受体(技术原理如下图2)。
图2：均相时间分辨荧光 (HTRF)原理图
HTRF的优势?
与传统检测技术相比, HTRF检测的主要优点：
1
灵敏度高，实验通量高
2
步骤简单，无需包被和洗板，无需避光，适用于贴壁细胞和悬浮细胞，只需将细胞进行刺激→裂解→加检测试剂→读板；（无需洗板机，不需要加热和避光孵育塔，成本降低，自动化程度高，Perkin Elmer提供一站式解决方案）
3
降低背景和提高信噪比，提高灵敏度，数据真实可靠
4
支持96或384孔板至更高通量分析检测
5
实验体系稳定，可耐受较宽的pH范围、二价金属离子、螯合物等，并可在48小时内反复多次检测
HTRF的应用？
检测可分析生物化学过程中的分子相互作用，被广泛用于研究激酶、细胞信号转导通路、蛋白相互作用PPI（protein-protein interaction）、DNA与蛋白的相互作用、细胞毒性以及受体与配体的结合。其中供体和受体可以被用于标记各种生物分子，应用范围包括表观遗传学，生物标志物定量，GPCR信号转导等。特别，该检测技术支持强大的混合-读数模式，无需进行任何清洗步骤。这一优点连同实验的稳定性，使该技术非常适用于自动化和筛选类应用。
珀金埃尔默JANUS® G3分析方法
开发工作站平台助力新药研发
该平台基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)。采用了TIBCO® Spotfire软件（包含在珀金埃尔默Signals VitroVivo™软件中）、JANUS® G3液体处理工作站，VICTOR® Nivo™多模式微孔板检测仪和Signals VitroVivo™软件。Spotfire软件为JANUS® G3分析方法开发工作站平台提供了板图和分步记录。工作站可自动在VICTOR® Nivo™微孔板检测仪上进行移液和读板。珀金埃尔默Signals VitroVivo™推荐引擎可对分析方法进行数据分析，并就试剂的最佳组合和浓度提出建议，以供进一步开发。
该平台完全一体化，无需编程知识或自动化经验。此平台已经过优化以消除实验流程开发的相关风险，并针对PPI分析等方法进行了系统性优化，提供完整的一体化解决方案。
来源于：珀金埃尔默企业管理（上海）有限公司
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