一文知晓|流式、免疫组化、免疫荧光的抗体区别

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上期回顾：《流式荧光技术检测与化学发光技术检测那些事儿》

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前两天有位老师问崔工，流式抗体与免疫组化抗体有什么区别？崔工收集了网络上的一些回答，供参考：

崔工收集了网络上的一些回答，供参考：

回答1：

两种抗体不一定通用，流式是用直接标记还是间接标记？如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。

如果恰好你的免疫组化，也是想用荧光素标记的抗体来直接标记，那就可以通用。

如果你的免疫组化要用其它的标记的话，或者是间接标记的话，就有麻烦，因为荧光素的标记很可能会影响二抗和一抗的结合。

回答2：

流式抗体是用于流式细胞仪检测的抗体，与之相对应的有免疫组化抗体，免疫荧光抗体等等。

回答3：

免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。

如果所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和WB，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。

崔工还请教了一位做抗体的朋友，他的回答是这样的：

表位抗原有差异，免疫组化抗体要实现不同组织的定位，半定量特异性检测，流式是定量表达。

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不同的实验对抗体有不同的要求

崔工觉得首先可以从抗体的应用原理及特点从侧面来了解会更加清楚。

抗体的应用一般来说除了做流式和免疫组化外，还可以做免疫荧光等其他实验。

免疫组化是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术，通过化学的方法使标记抗体显色，对组织胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测。

免疫荧光是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的荧光标记技术，通过激光激发使荧光素发出荧光。

在荧光显微镜下观察荧光的变化从而对细胞内的抗原进行分析的技术。

流式荧光一样是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的荧光标记技术，

过激光激发使荧光素发出荧光。

不过检测是通过流式细胞仪来检测的。

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再从WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC对抗体需求有什么区别来看

WB的蛋白经过加热变性之后都变成线性的结构。因此最好的抗体是采用非常特异序列的人工合成多肽的方法来做实验，结果也非常特异。

IP/CHIP. 我们用抗体去结合生理状态下的蛋白质，因此IP的抗体最好使用纯化的天然蛋白制作的抗体来做，也可以用纯化的重组蛋白的抗体。

最好不要用人工合成多肽制作的抗体，因为这种抗体识别的位点可能被深深地藏在了蛋白的内心深处。

CHIP和IP没有太大的区别，唯一的问题在于，如果抗体识别的表位和该蛋白质与DNA结合的部位一致，则会导致CHIP实验的失败。

 IF/IHC. 免疫荧光和免疫组化中需要进行固定一步，固定是为了尽量让细胞的形态结构维持和原有的一致。

这种化学物质的固定使蛋白质变性凝固，与天然状态下的蛋白质有了一定的区别，但是又不同WB中加热变性变成了线性的结构。

因此在做IF/IHC实验中，最合适的抗体可以是纯化的重组蛋白得到的抗体，也可以是人工合成多肽得到的抗体（多肽是在蛋白质的表面）。

FC. 流式细胞中分为两种，一种是活细胞的流式，这种流式最好采用是天然蛋白或者重组蛋白的抗体来做，另外一种是经过固定之后的流式，和IF/IHC 所用抗体一致。

在做流式细胞中，我们有直接标记和间接标记，间接标记不如直接标记真实准确。因此我们选择流式抗体要采用带有荧光标记的抗体；

如果研究的蛋白没有直接标记的抗体，那么就采用间接标记抗体，需要添加荧光二抗。

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