【飞诺美色谱】鸡蛋中三聚氰胺的检测 HPLC 法

1.三聚氰胺标准溶液配制
称取三聚氰胺标样 10.0 mg，加流动相溶解定容至 100 mL，即得浓度为 100 mg/L 的三聚氰胺标样溶液。将浓度为 100 mg/L 的三聚氰胺标准溶液分别用水稀释成浓度为 1 mg/ L、5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L、20 mg/L 的标准品溶液，用 0.45 µm 滤膜过滤后进液相色谱检测。

2.样品提取
将鸡蛋打开搅匀，分别称取 1.00 g 鸡蛋样本置于 10 mL 具塞离心管中，分别加入 100 mg/L 三聚氰胺标样溶液 10 µL、20 µL、100 µL，分别得到添加浓度为 1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、10.0 mg/kg 的样本。往装有上述样本的具塞离心管中分别加入10 mL 1%三氯乙酸溶液，2 mL 5% 醋酸铅溶液，摇匀，超声20 min，8000 rpm 离心 10 min，全部上清液转入固相萃取仪上样管中。
Cleanert® PCX 混合型阳离子交换固相萃取柱，标记序号依次放入Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪中，上样管中放置对应样品，设定操作程序如下：3 mL 甲醇，3 mL 水依次活化，加样，3 mL 水，3 mL 甲醇淋洗，抽干，最后用 5 mL 5% 的氨化甲醇洗脱 (V/V)，接收洗脱液 (以上操作流速均为 1 mL/min)，取出收集管于 50℃ 氮气吹干，用 1 mL 流动相定容，0.45 µm 滤器过滤后进液相色谱检测。

3.色谱条件：
色谱柱：Venusil® ASB C8，4.6 × 250 mm，5 µm；
流动相：乙腈：10 mM/L 柠檬酸 + 10 mM/L 庚烷磺酸钠缓冲液 = 7：93 (pH=3.0)
波 长：240 nm； 流 速：1 mL/min；进 样：20 µL。

4.实验结果：

4.1峰型与分离度
分别移取浓度为 1.0 mg/L、5.0 mg/L 的三聚氰胺标准溶液，分别连续进样6次，结果如表1所示。
由表1结果可见，本方法具有很好的精密度和重现性。

4.2标准校正曲线
根据表2数据计算线性方程为：y = 87.43x - 13.67，R² = 0.999 ，相关曲线见图2。
结果显示，该方法在 1 ~ 20 mg/kg 范围内线性关系良好。
表 2 标准校正曲线实验数据

浓度mg/kg	峰面积第1次进样	峰面积第2次进样	峰面积均值
1.0	89	79	84
5.0	423	440	431
10.0	832	844	838
15.0	1265	1299	1282
20.0	1689	1823	1756

图 2 浓度与峰面积的回归曲线

结果显示，该方法在1~20 mg/kg范围内线性关系良好。

4.3添加回收率
由表3可见，本方法检测鸡蛋中三聚氰胺回收率较好
表 3 添加浓度与回收率数据

添加浓度 (mg/kg)	峰面积	计算含量	回收率(%)
1.0	19.9	1.158892	115.89
1.0	21.0	1.214532	121.45
2.0	41.7	2.261587	113.08
2.0	40.8	2.216062	110.80
10.0	188.8	9.702247	97.02
10.0	219.6	11.26018	112.60

5.结论
通过上述实验可见， 运用本方法测定鸡蛋中三聚氰胺，基质净化效果好，杂质干扰小，色谱峰型良好对称度高，操作简单方便，和准确度高等优点，非常适用于鸡蛋中三聚氰胺的检测。

6.订货信息

产品名称	规格包装	订货号
三聚氰胺标准品 ( ≥99.0%)	100 g/pk	SJ-SJQA-100
庚烷磺酸钠 (色谱级)	25 g	ION-Q7-25
LC-10F 高效液相色谱仪	10 mL/min，梯度系统，200-800nm 双波长检测器	FL-LC010GS
CC-100 分析型色谱柱温箱	温控范围：5 ~ 70℃；可安装 1-2 支 300mm 色谱柱	CC-100
Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪	4 通道 24 位	SPE-40
Cleanert® PCX	60 mg/3 mL，50/pk	CX0603
Venusil® ASB C8 液相色谱柱	4.6 × 250 mm，5 µm	VS852505-0
针式过滤器 (Nylon)	0.45 µm，直径13 mm，200/pk	AS021345
一次性无针头注射器	5 mL，100/pk	ZSQ-5ML
1.5 mL 样品瓶	短螺纹透明带书写 32 × 11.6 mm，100/pk	1109-0519
1.5 mL 样品瓶盖	9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫，45．Shore A1.0 mm，100/pk	0915-1819
甲醇	4 × 4 L/瓶	AH230-4