【飞诺美色谱】使用 LC-MS/MS 检测 96 孔蛋白沉淀板处理的血浆中普瑞巴林的含量

一、 引言

普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放。该药是一种新型γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。普瑞巴林一般为口服用药，其生物利用率可达到或高于 90%。在血浆中的血药浓度约 0.04到 9.5μg/mL

二、 材料与方法 普瑞巴林（pregabalin)，分子式C8H17NO2，分子量159.23，CAS : 148553-50-8，pKa 4.2和10.6。其结构式见图1。

本实验使用96孔蛋白沉淀板对血浆样品进行净化：Cleanert蛋白沉淀板(Cat:96CD2025-Q, Spec: 2mL/well, Lot: 150623)，96位正压装置，96孔接收板，Venusil MP C18(2)( 2.1x50mm，5μm，110Å )，以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品；LC/MS/MS, API 4000+液相色谱-串联质谱仪（SCIEX）。血浆为牛血浆。HPLC条件色谱柱：Venusil MP C18（2）( 2.1x50mm，5μm，110Å);流速：200 μL/min；柱温：30℃；进样量：5 μL；流动相：A-0.1%甲酸水溶液；B-甲醇。

质谱条件扫描模式：电喷雾电离正模式；采集模式：多反应监测（MRM）；电喷雾电压：4500V；气帘气（curtain gas）：30；雾化气（gas 1）：60；辅助气（gas 2）：30；离子源温度（TEM）：450℃

样品处理方法蛋白沉淀1.将50μL血浆和50μL甲醇/水（1/1）提前混合。然后向96孔板中加入500μL甲醇，再将上面混好的血浆加到孔中，用移液器反复抽吸几次或使用漩涡混合器混合；2.使用SPE-M96正压装置，调节压力，将液体收集到96孔收集板中，3分钟后停止正压装置；3.向收集板中各孔中加入400μL 0.1%甲酸水，混匀，准备检测。

三、 结果与讨论

四、结论本实验使用蛋白沉淀板对血浆中的普瑞巴林进行了快速提取检测。在25-100ng/mL浓度下，平均回收率为96.8%和95.9%，RSD值小于5.05%，可以满足相关的检测需求。