【飞诺美色谱】基于 Cleanert C2 SPE 柱的血浆中氯吡格雷活性代谢物的萃取及 LC-MS

一 背景 氯吡格雷是一种新型的噻吩并吡嗪类衍生物，具有抗血小板聚集作用及抗血栓形成作用。 氯吡格雷口服后即可被人体快速吸收并代谢，其主要代谢产物为氯吡格雷酸，氯吡格雷的活 性代谢物为氯吡格雷氧化成含氧化合物之后水解而成的一种硫醇衍生物，该化合物极不稳定， 在血浆中很难检测到。 本文通过衍生化方法，并采用 Cleanert C2 SPE 柱建立了血浆中氯吡格雷活性代谢物的 前处理方法，为氯吡格雷的人体生物等效性研究提供参考方法。

二 目标物信息

三 材料及仪器 Cleanert C2 柱（150mg/3mL）；Cleanert M08 正压型固相萃取装置；Venusil MP C18(2) （2.1*50mm，5μm，110Å）；2-溴-3‘-甲氧基苯乙酮(MPB)。

四 样品处理方法 

4.1 样品衍生化 采血后立即向每份血样中加入 25μL 500 mM 溶解于乙腈中的 MPB，轻轻混合(静止 10  min)，3000rpm 离心 30 min 以分离血浆。将血浆样品保存于-80℃待测。 4.2 样品净化 （1）样品预处理：精密吸取血浆 400μL，加入 550μL 1%蚁酸，涡旋振荡使混匀。 （2）活化：将 Cleanert C2 柱先后用 300μL 甲醇和 300μL 纯水进行预处理。 （3）上样：再将血浆混合物上样至处理过的 Cleanert C2 柱上。 （4）淋洗：用 500 μL 1%蚁酸和 500μL 50 mM 醋酸铵水溶液冲洗柱子。 （5）洗脱：先后用 150μL 甲醇和 100μL 50 mM 醋酸铵进行洗脱 将洗脱物进行 LC-MS/MS 分析。 

五 仪器检测条件 5.1 HPLC 条件色谱柱：Venusil MP C18(2)（2.1*50mm，5μm，100A） 流速：200μL/min；流动相：0.1%甲酸水/乙腈（55/45，v/v） 柱温：30℃；进样量：3μL 5.2 质谱条件 扫描模式：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测（MRM）

六 结果 对血浆样品进行氯吡格雷活性代谢物加标实验，加标回收率均高于 93%，本方法对目 标物的 LOQ 低至 0.5ng/mL。

七 结论 本方法采用 Cleanert C2 小柱对血浆中氯吡格雷活性代谢物进行萃取分析，样品基质对 分析物没有明显干扰，回收率高于 93%。该方法适用于血浆中氯吡格雷活性代谢物的日常 监测分析。

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