【飞诺美色谱】奶粉中雌酮、雌二醇、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮的检测

1.参考方法博纳艾杰尔内部方法。2.实验材料Cleanert®PEP吡咯烷酮化聚苯乙烯/二乙烯基苯固相萃取柱(100mg / 6mL，P/N:PE1006，博纳艾杰尔科技)；Cleanert®Silica硅胶固相萃取柱(1000mg / 6mL，P/N:SI0006，博纳艾杰尔科技)；液相色谱柱(Bonshell C18，2.1×100 mm，2.7 μm，P/N:SC921002-0，博纳艾杰尔科技)；标准品：雌酮(CAS.No. 53-16-7)、雌二醇(CAS.No. 50-28-2)、醋酸甲地孕酮(CAS.No. 595-33-5)、醋酸氯地孕酮(CAS.No. 302-22-7 )，购自中国药品生物制品检定所。3.实验步骤Cleanert®PEP样品提取净化法提取：取2 g奶粉，加标，然后加12 mL 80%乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心(9000 r/min，6 min)取3 mL上清液，加入9 mL超纯水稀释，涡旋混匀后，待过Cleanert®PEP柱净化。净化步骤：活化：以5 mL乙腈，5 mL水活化Cleanrt®PEP；上样：把上述稀释后的样品溶液过柱，流速控制以1 mL/min为宜；淋洗：待样品溶液完全通过小柱后，用5 mL 5%乙腈 淋洗小柱，然后真空抽干3 min；洗脱：以3-5 mL乙腈洗脱目标，收集流出液；浓缩：收集液以氮气吹干(40℃水浴)，后以50%甲醇水 定容至1 mL，混匀后过0.22 μm尼龙针式过滤器 过滤，进LC-MS/MS分析。(以上萃取操作通过Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪完成)Cleanert®Silica样品提取净化法提取：取2 g奶粉，加标，然后加12 mL乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心(9000 r/min，6 min)取3 mL上清液，待过Cleanert®Silica柱净化。 净化步骤：活化：以5 mL乙腈活化Cleanrt®Silica小柱；上样：把上述提取液过柱，收集流出液；淋洗：以5 mL乙腈洗涤小柱，收集流出液；浓缩：合并以上流出液，以氮气吹干(40℃ 水 浴)，后以50%甲醇水定容至1 mL混匀后0.22 μm 尼龙针式过滤器过滤，进LC-MS/MS分析。(以上萃取操作通过Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪完成)

4.色谱条件孕激素(醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮)测定液相色谱条件：Bonshell C18，2.1×100 mm，2.7 μm；流动相：A:0.1%甲酸水，B:甲醇；流 速：0.3 mL/min；柱 温：40℃；进样量：10 μL；参考质谱条件：电离源：电喷雾正离子模式。雌激素(雌二醇、雌酮)测定色谱条件：Bonshell C18，2.1×100 mm，2.7 μm；流动相：A:水，B:乙腈；流 速：0.3 mL/min；柱 温：40℃；进样量：10 μL；参考质谱条件：电离源：电喷雾负离子模式。5.实验结果及谱图结果见图1、图2。用Cleanert®PEP (反相)或Cleanert®Silica (正相)两种净化手段均可到达满意的回收率和净化效果，添加浓度在25 ppb时回收率可达到80%。用Bonshell色谱柱可以实现样品的快速分离，大大提高工作效率。雌二醇和雌酮两种激素，质谱响应偏低，质谱条件需要进一步优化。本实验结果采用单点定量判定，结果可能有失偏颇，详细数据需做基质添加标准曲线确证，方法的精密度，稳定性等亦需要进一步确证。