【飞诺美色谱】LC/MS/MS 检测血清中类固醇激素

LC/MS/MS 检测血清中类固醇激素

— 背景

类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。
类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用 Cleanert® PEP
96 微孔板对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，该方法适合高通量样品前处理。


二 目标物信息

表 1 化合物结构

三 材料及仪器

Cleanert PEP 96 微孔板(5mg/1mL)；96 孔板正压装置；96 位接收板；Venusil ASB C18

（2.1*50mm，3μm，150 Å）；API 4000+。


四 样品处理方法

4.1 样品预处理

100μL 血清样品与 100μL 含有 1%甲酸的甲醇/水溶液混合（50/50，v/v）

4.2 SPE 过程

活化：依次用 200μL 甲醇、200μL 水活化；

上样：将预处理过的血清样品上样至 96 孔板中；

淋洗：加入 400μL 甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗样品中的干扰物；

洗脱：加入 200μL 1%甲酸甲醇，用 96 位收集板收集洗脱液用于 LC-MS/MS 检测。（将洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限）
五 仪器检测条件

5.1 HPLC 条件

色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å） 流速：200μL/min
柱温：30℃ 进样量：3μL
流动相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈（ 40/ 60，v/v）

5.2 质谱条件

扫描模式：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测（MRM）
表 2 参数信息

六 结果

表 3 加标回收率数据

加标浓度	醛固酮	氢化可的松	睾酮	脱氢表雄酮	黄体酮
30ppb	85.9%	87.0%	105.5%	110.6%	97.7%

七 结论

在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用Cleanert® PEP 96 孔板提取血清中的类固醇，加快了检测速度，相较免疫法提高了最低检测浓度，回收率高于 85%，可满足实验室检测相关物质的需要。

八 订货信息表

产品名称	规格/包装	订货号
Cleanert PEP	96 微孔板，5mg/1mL	PE00501-MW
Cleanert M96 生物样品前处理仪	与 96 孔板匹配	SPE-M96
Cleanert V96 氮吹浓缩仪	与 96 孔板匹配	NV-96G
96 位接收板	1mL，与 96 孔板匹配	96SP1036-Y
Venusil ASB C18	2.1*50mm，3μm,150 Å	VS930502-0
甲醇	HPLC，4*4L	AH230-4
乙腈	HPLC，4*4L	AH015-4
水	LC-MS 级，4*2.5L/箱	LC365