Pippin Prep全自动DNA电泳回收仪助力细胞外miRNA测序，用于子痫前期的诊断和预后评估

文献速递：Pippin Prep全自动DNA电泳回收仪助力细胞外miRNA（ex-miRNA）测序，用于子痫前期的诊断和预后评估

Discovery and verification of extracellular microRNA biomarkers for diagnostic and prognostic assessment of preeclampsia at triage

子痫前期（Preeclampsia，PE）是妊娠期特有的一种多系统疾病，其特点是妊娠20周以后出现新发的高血压和蛋白尿，会增加胎儿早产和产妇死亡的风险。目前，临床对子痫前期无非常准确的早期诊断或预后评估方法。来自加州大学圣地亚哥分校的科研团队发现，在母体血液样本中的miRNA可以作为子痫前期诊断和后期干预效果评估的生物标志物。相关论文于2023年12月发表于《Science Advances》期刊，题为“Discovery and verification of extracellular microRNA biomarkers for diagnostic and prognostic assessment of preeclampsia at triage”。

Abstract

We report on the identification of extracellular miRNA (ex-miRNA) biomarkers for early diagnosis and prognosis of preeclampsia (PE). Small RNA sequencing of maternal serum prospectively collected from participants undergoing evaluation for suspected PE revealed distinct patterns of ex-miRNA expression among different categories of hypertensive disorders in pregnancy. Applying an iterative machine learning method identified three bivariate miRNA biomarkers (miR-522-3p/miR-4732-5p, miR-516a-5p/miR-144-3p, and miR-27b-3p/let-7b-5p) that, when applied serially, distinguished between PE cases of different severity and differentiated cases from controls with a sensitivity of 93%, specificity of 79%, positive predictive value (PPV) of 55%, and negative predictive value (NPV) of 89%. In a small independent validation cohort, these ex-miRNA biomarkers had a sensitivity of 91% and specificity of 57%. Combining these ex-miRNA biomarkers with the established sFlt1:PlGF protein biomarker ratio performed better than either set of biomarkers alone (sensitivity of 89.4%, specificity of 91.3%, PPV of 95.5%, and NPV of 80.8%). 

研究人员从子痫前期检查的参与者中收集母体血清，然后以血清为样本进行miRNA 测序。结合生物信息学分析，最终确定了三组双变量 miRNA 生物标志物（miR-522-3p/miR-4732-5p、miR-516a-5p/miR-144-3p 和 miR-27b-3p/let-7b-5p）。随后，通过检测miRNA生物标志物的差异，用于区分不同严重程度的子痫前期病例。结果显示检测灵敏性为93%，特异性为 79%，阳性预测值 （PPV） 为 55%，阴性预测值 （NPV） 为 89%，指示效果十分显著。同时小型独立验证实验的结果显示，再次验证了这几组生物标志物在不同类型的病例中确有显著差异。如果将发现的ex-miRNA生物标志物与已建立的 sFlt1：PlGF 蛋白生物标志物相结合，其效果更优（灵敏性为 89.4%，特异性为 91.3%，PPV 为 95.5%，NPV 为 80.8%）。

• 期刊：SCIENCE ADVANCES（IF 15.4）
  

• 发表年份：2023

• 物种：人（Human）

• 文库类型：120-135 非编码小RNA文库（Small non-coding RNA）

• 文库富集和精准回收：Sage Science公司Pippin Prep全自动DNA电泳回收仪

• 测序：Illumina HiSeq 4000二代测序仪

细胞外miRNA（ex-miRNA）测序流程：1）Norgen的血浆/血清和外泌体 RNA 纯化试剂盒分离样品 ex-RNA；2）Agilent 的RNA 6000 Pico Kit对分离的ex-RNA 进行质量分析；3）NEB的Next Multiplex Small RNA Library Prep Set试剂盒构建miRNA-seq文库；4）Zymo Research的 DNA Clean & Concentrator-5试剂盒进行文库纯化，并对纯化的文库进行质量分析；5）Sage Science的Pippin Prep及配套3%琼脂糖凝胶试剂盒进行文库片段回收，回收范围设置为120-135bp,只保留miRNA-seq文库，彻底去除其他杂带；6）在Illumina的HiSeq 4000仪器上测序。

原文

Robert Morey et al. ,Discovery and verification of extracellular microRNA biomarkers for diagnostic and prognostic assessment of preeclampsia at triage.Sci. Adv.9,eadg7545(2023).

美国Sage Science是全球领先的全自动DNA脉冲场电泳回收仪的生产厂家，拥有美国技术专利，各个型号产品可以高效完成不同长度范围的DNA片段的精准回收，广泛用于二代测序、三代测序以及多种分子生物学相关领域。

环亚生物科技有限公司作为美国Sage Science公司在中国区的独家代理商，自2011年以来将Sage Science的产品线引入国内，一直为国内用户提供专业的全自动核酸片段回收仪的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Sage Science用户。

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