荧光定量PCR技术实验操作步骤

荧光定量PCR(qPCR)是一种基于PCR反应的核酸定量技术，利用荧光染料或荧光探针来监测PCR反应过程中目标基因的扩增量，并通过荧光信号强度来定量目标基因的初始拷贝数。

荧光定量PCR操作步骤：
1、实验准备：
　　试剂准备
qPCR试剂盒：包含TaqDNA聚合酶、dNTP、缓冲液、荧光染料/探针等。
　　模板DNA：通常是提取的RNA反转录得到的cDNA。
　　引物：与目标基因片段两端序列互补的寡核苷酸。
2、仪器准备：
　　实时荧光定量PCR仪：用来进行PCR反应并实时检测荧光信号。
　　移液器：用于精准移取试剂。
　　其他材料：无菌离心管、微量移液管、EP管、移液器枪头等。
3、操作步骤：
1）、配制反应体系：根据试剂盒说明书，将所需的试剂（如PCR反应缓冲液、Taq酶、dNTP、引物、模板DNA和荧光染料/探针）混合在一起，配制反应体系。
2）、加样：将配制好的反应体系加入qPCR仪的反应管或反应板中。
3)、运行程序：在qPCR仪上设置相应的程序，包括温度梯度、循环次数、荧光检测等参数。
4）、数据分析：运行结束后，qPCR仪会自动收集荧光数据并进行分析，绘制出Ct值曲线，并计算目标基因的相对或绝对含量。