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副溶血弧菌的快速检验方法
1 适用范围:用于各类食品和原料中副溶血弧菌的检测,以及突发事件应急检测需要。
2 方法原理:采用一种商品化的一次性培养基产品,含有高选择性培养基、吸水凝胶和特异酶指示剂等重要成分,培养15~24小时就可确认是否有副溶血弧菌的存在。
3 操作方法
3.1 样品处理:取样品 25 mL(g)放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内,充分振摇或置均质器中制成1:10的样品匀液。
3.2 接种:将测试片置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个样品接种2片。
3.3 培 养: 将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
3.4 结果判别:呈紫红色的菌落为副溶血弧菌。多数非目的菌在测试片上不生长,少数能生长,如创伤弧菌和霍乱弧菌,但菌落呈蓝色,明显区别于目的菌。对于出现阳性菌落的样品,最好用其他方法作进一步的鉴定。
4 附加说明
4.1 汕头出入境检验检疫局技术中心的对比试验结果表明,副溶血弧菌测试片具有较高的检测灵敏度和准确性,对纯菌的检测灵敏度达到8cfu/mL,与SN标准方法符合率达到90%以上。
4.2 注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。
4.3 出现阳性菌落的样本,最好用其他更为可靠的方法进行验证,没有条件的话至少再取样重复检验一次。