【主要组成成分】抗D(IgM)单克隆细胞株培养上清液,NaCl,磷酸盐缓冲液等。 【储存条件及有效期】 1. 2-8℃储存。如果长时间储存在高温或反复冻融会使试剂失去活性。 2. 有效期:24个月。 【适用仪器】本品为非仪器配套试剂。 【样本要求】红细胞抗凝或不抗凝样本。 【检验方法】 1. 平板法(玻片法) (1) 加1滴抗D试剂于玻片上。 (2) 再加1滴35-45%的被检红细胞悬液。该红细胞悬液可以是盐水悬液,也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。 (3) 在圆形的玻片区域中混匀,(直径约为20mm大小),前后缓慢摇晃玻片。2分钟左右肉眼判读结果。不要将试剂的干燥与凝集相混淆。 (4) 如果呈阴性,需用试管法重做一遍试验。 2. 试管法 (1) 加1滴抗D试剂于一支预先标记好的试管中(75×12mm或75×10mm)。 (2) 再加1滴约3-5%的被检红细胞悬液于试管中。混匀。 (3) 离心,速度和时间可选择以下二种之一: a) 转速1000rpm,时间1分钟; b) 转速3400rpm,时间15秒。 (4) 检查是否有溶血(溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染),然后轻轻摇晃,使细胞再悬浮起来。 (5) 观察凝集状况,并立即记录结果。必要时可借助显微镜。 (6) 若是阴性结果,需在37℃孵育15-30分钟,然后再离心观察结果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。 3. 微量板法(U型板) (1) 加1滴抗D试剂于U型底的微孔中。 (2) 再在微孔中加1滴约3-5%的被检红细胞悬液,细胞悬液需事先制备于生理盐水中。 (3) 用机械的方法将U型板混匀。 (4) 用板式离心机离心:2000rpm,时间30秒。不同的离心机、不同的微量板所需要的离心条件有所区别,正确实验的结果需要适当的离心,使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。 (5) 检测溶血情况(溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染)。 (6) 结果判断:用机械振荡U型板,再悬浮细胞,根据悬浮情况来判断凝集。阳性反应,出现红细胞凝集,而阴性反应则在微孔中会出现均匀细胞悬液。 (7) 可用肉眼和自动化仪器判读结果。 (8) 如果呈阴性,需用试管法重做一遍试验。 【检验结果的解释】 阳性反应:出现红细胞凝集,为RhD阳性。 阴性反应:红细胞不出现凝集,为RhD阴性。 【检验方法的局限性】 本试剂不能凝集Category DⅥ细胞,对于阴性和弱阳性结果,请按有关安全输血规范进行确认试验,必要时送血型参比实验室进行确认。