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【产品名称】 通用名称:禽流感病毒H5亚型核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法) 英文名称:Diagnostic Kit for Avian Influenza Virus H5 Genotype (RT-PCR Fluorescence Probing) 【预期用途】 禽流感病毒H5亚型属于高致病性禽流感,对禽类危害巨大,甚至会感染人群.本试剂盒用于定性检测具流感症状的人群或禽类动物的唾液或分泌物中的H5亚型禽流感病毒,适用于对该亚型病毒的检测、临床辅助诊断和流行病学调查。 【检验方法】 一、 样品采集与处理 1、样品采集:拭子样品:人咽拭子、鼻咽抽吸物、胸腔灌洗液、禽类动物的唾液或分泌物等;组织样品:采集有明显病变的组织样品,于组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨,再加少量PBS混匀,4℃条件下离心取上清。 2、样本量:采样量要足够进行一次复检。 3、样本运输:采集好的样本应立即用加冰保温盒储存,尽快送检。 4、样本保存:短期保存在2-8℃,但不应超过72小时;长期保存时建议转移到冻存管中-70℃保存。 5、样本在运输和储存过程中要尽量避免反复冻融,检测前需充分解冻。 二、病毒RNA的提取 1、向一个无RNA酶的1.5mlEP管中分别加已处理的样品液300 μL、裂解液 350μL,充分混匀,静置2~5min; 2、分别加入氯仿150μL,4℃条件下12000rpm,离心15min; 3、将上层无色部分小心转移到一个新的无RNA酶的1.5ml EP管中(切勿碰到中间层),加400ul异丙醇,沉淀10-15 min,4℃条件下12000rpm,离心15min; 4、弃上清,向沉淀中加400μL洗液轻轻混匀,4℃条件下12000rpm,离心10min; 5、倒掉上清液,然后将EP管倒置在滤纸上吸干管壁余液或4℃条件下12000rpm,空离30 sec后吸去残液(注意:吸头勿接触到沉淀),再自然晾干; 6、滴加10-20μL洗脱液于管底,溶解RNA;