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碱性缓冲液实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。碱性缓冲液小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
碱性缓冲液注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
碱性缓冲液其它产品信息:
胡椒碱 A0551 Piperine
鸢尾黄素 A0552 Tectorigenin
鸢尾苷(射干苷) A0553 Tectoridin
五味子甲素 A0554 Schizandrin A
五味子乙素 A0555 Schizandrin B
五味子醇甲 A0556 Schisandrin
五味子酯乙 A0557 Schizandrol B
五味子酯甲 A0558 Schizandrol A
五味子醇乙 A0559 Schisandrol B
烟酰胺 A0560 Nicotinamide
西红花苷(藏红花素,番红花苷) A0561 Crocin
西红花苷I A0562 Crocin I
西红花苷II A0563 Crocin II
桑色素 A0564 Morin
D-(-)-奎宁酸 A0565 D-(?)-Quinic acid
梓醇 A0566 catalpol
根皮苷 A0567 phloridzin
蜕皮激素 A0568 Ecdysterone
7-姜酚(姜辣素) A0569 7-gingerol
蒿本内酯 A0570 Z-Ligustilide
脱氧野尻霉素(DNJ) A0571 2-Deoxynojirimycin
剑麻皂苷元 A0572 sisalagenin
柠檬苦素 A0573 Limonin
诺米林 A0574 Nomilin
河豚毒素 A0575 Tetrodotoxin
罗汉果皂甙V A0576 Mogroside Ⅴ
安石榴甙 A0577 Punicalagin
獐牙菜苦苷 A0578 Swertiamarin
朝藿定A A0579 epimedin A
朝藿定B A0580 epimedin B
朝藿定C A0581 epimedin C