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微量DNA助沉剂实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。微量DNA助沉剂小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
微量DNA助沉剂注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
微量DNA助沉剂其它产品信息:
小鼠抑制素βE(INHβE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
鸡饥饿素(GHRL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人Ras同源基因家族成员A(RHOA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人细胞分裂周期因子42(CDC42)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人肝细胞生长因子激活因子(HGFAC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠毛细血管扩张性共济失调突变因子(ATM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人分拣连接蛋白9(SNX9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人犬尿氨酸酶(KYNU)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人半胱氨酸共轭β裂解酶(CCβL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人色氨酸-2,3-双加氧酶(TDO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人芳犬尿氨酸甲酰胺酶(AFMID)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
鸡血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人Nischarin蛋白(NISCH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠胰岛素受体底物3(IRS3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠Janus激酶1(JAK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠胰岛素受体底物2(IRS2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人热休克蛋白70(HSP70)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人血红蛋白γ2(HBγ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人乙醇脱氢酶2(ADH2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人丝蛋白Aα(FLNα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠神经钙黏蛋白(CDH2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人2',5'-寡腺苷酸合成酶样蛋白(OASL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人40kDa热休克蛋白2(HSPF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人Neugrin蛋白(NGRN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)