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通用溶胶液实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。通用溶胶液小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
通用溶胶液注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
通用溶胶液其它产品信息:
大鼠G补缀FHA域血管生成因子1(AGGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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小鼠VI型胶原(COL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人蛋白激酶Cα(PKCα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人白介素13受体α2(IL13Rα2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠钙敏感受体(CASR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠VI型胶原(COL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠VI型胶原(COL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人连环蛋白α1(CTNNα1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1(OGG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠APEX核酸酶1(APEX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人转化受体电位阳离子通道亚家族A成员1(TRPA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人细胞色素P450家族成员27A1(CYP27A1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人核纤层蛋白B2(LMNB2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人含WW域E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠脾脏病灶病毒前病毒整合原癌基因(SPI1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠干扰素调节因子4(IRF4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人髓鞘蛋白脂蛋白样蛋白(PLPL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠粘着斑激酶(FAK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人抗甘露糖结合蛋白抗体(Anti-MBL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人Scleraxis同源物A(SCXA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠溶质载体家族16成员1(SLC16A1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠封闭蛋白5(CLDN5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)