让ELISA实验不失败的经验

ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板、假阳性、全显色小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 试剂盒、信号值比空白还低等等。下面就由我抛砖引玉地来说一下，做的经验总结：

1、有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下：①亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。③脂类物质：可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。

2、应留意以下原理：因小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 试剂盒为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。　　

3、但终极选用什么，要依据试验详细来实践。常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。

4、 在洗板时会有一定误差，小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 试剂盒塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板：可以说在ELISA操纵中，洗涤是最主要的枢纽技术。

5、加抗体标本(和二抗)：注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅。

6、显色：显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。

7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 试剂盒如出现问题也好分析。

HZA528Mu 小鼠血小板衍生生长因子A(PDGFA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Platelet Derived Growth Factor Subunit A (PDGFA)

CEB881Mu 小鼠磷脂酰丝氨酸(PS)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Phosphatidylserine (PS)

HZN576Mu 小鼠含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5(FNDC5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibronectin Type III Domain Containing Protein 5 (FNDC5)

CEA231Mu 小鼠尿皮质素1(UCN1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Urocortin 1 (UCN1)

HZH792Mu 小鼠胰岛素启动因子1(IPF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Insulin Promoter Factor 1 (IPF)

HZH339Mu 小鼠骨膜蛋白(POSTN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Periostin (POSTN)

HZC745Mu 小鼠围脂滴蛋白1(PLIN1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Perilipin 1 (PLIN1)

HZD373Mu 小鼠激肽释放酶13(KLK13)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Kallikrein 13 (KLK13)

HZB603Mu 小鼠生长调节致癌基因β(GROβ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Growth Regulated Oncogene Beta (GROb)

HEA544Mu 小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒(酶联免疫吸附试验法，高敏) High Sensitive ELISA Kit for Immunoglobulin G (IgG)

CEB237Mu 小鼠纤维蛋白肽A(FPA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibrinopeptide A (FPA)

HZC316Mu 小鼠精氨酸加压素受体2(AVPR2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Arginine Vasopressin Receptor 2 (AVPR2)

HZA309Mu 小鼠半乳糖凝集素9(GAL9)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Galectin 9 (GAL10)

HZA126Mu 小鼠内皮细胞TEK酪氨酸激酶(Tie2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for TEK Tyrosine Kinase, Endothelial (Tie3)

HZA072Mu 小鼠防御素β2(DEFβ2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Defensin Beta 2 (DEFb3)

CEA228Mu 小鼠抗缪勒管激素(AMH)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Anti-Mullerian Hormone (AMH)

HZA231Mu 小鼠尿皮质素1(UCN1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Urocortin 1 (UCN2)

HZA278Mu 小鼠踝蛋白(TLN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Talin (TLN)

HZA937Mu 小鼠肾足蛋白(NPHN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Nephrin (NPHN)

CEC036Mu 小鼠转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Transferrin (TRF)

HZK477Mu 小鼠跨膜蛋白27(TMEM27)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Transmembrane Protein 27 (TMEM28)