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马-达二氏犬肾细胞系 MDCK (NBL-2)细胞凋亡检测技术与方法详解:
细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(PCD: Programmed Cell Death),是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程.它是一个主动的,高度有序的,基因控制的,一系列酶参与的过程.细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来.凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法.
一、细胞凋亡的形态学检测
根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法.
1、光学显微镜和倒置显微镜
(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体.贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.
(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细马-达二氏犬肾细胞系 MDCK (NBL-2)细胞胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态.
2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况.
常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI.三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的马-达二氏犬肾细胞系 MDCK (NBL-2)细胞A-T碱基区.紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光.
Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml.DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色.储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml. 结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;aⅡ期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;bⅡ期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体细。
胞凋亡检测技术与方法图
马-达二氏犬肾细胞系 MDCK (NBL-2)细胞
CEB067Hu 人YY肽(PYY)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Peptide YY (PYY)
HZB068Hu 人多药耐药关联蛋白1(MRP1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Multidrug Resistance Associated Protein 1 (MRP1)
CEB069Ge 人二磷酸腺苷(ADP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Adenosine Diphosphate (ADP)
HZB070Hu 人类胰蛋白酶(TPS)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tryptase (TPS)
CEB186Hu 人胃泌素释放肽前体(ProGRP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Pro Gastrin Releasing Peptide (ProGRP)
CEB187Hu 人强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Big Dynorphin (Dyn)
HZB189Hu 人去唾液酸糖蛋白受体1(ASGPR1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Asialoglycoprotein Receptor 1 (ASGR1)
HZB193Hu 人溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Lysozyme (LZM)
HZB197Hu 人软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cartilage Oligomeric Matrix Protein (COMP)
HZM767Hu 人锌指同源框蛋白4(ZFHX4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Zinc Finger Homeobox Protein 4 (ZFHX4)
HZB201Hu 人接触蛋白1(CNTN1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Contactin 1 (CNTN1)
HZB380Hu 人蛋白激酶Cζ(PKCζ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Protein Kinase C Zeta (PKCz)
HZB385Hu 人转录激活因子4(ATF4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Activating Transcription Factor 4 (ATF4)
HZB388Hu 人中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL)
HZA791Hu 人骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Osteonectin (ON)
HZA611Hu 人血小板反应蛋白(THBS1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thrombospondin 1 (THBS1)
HZA614Hu 人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡbⅢa)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa)
HZA615Hu 人纤溶抑制因子(TAFI)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor (TAFI)
HZA616Hu 人V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog A (RELA)
AEA527Hu 人抗氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Anti-Oxidized Low Density Lipoprotein Antibody (OLAb)
HZA618Hu 人速激肽受体2(TACR2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tachykinin Receptor 2 (TACR2)
HZA620Hu 人解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒 ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloprotease 8 (ADAM8)
HZA784Hu 人淀粉酶β(Amyβ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Amylase Beta (Amyb)
HZA782Hu 人碳酸酐酶Ⅱ(CA2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Carbonic Anhydrase II (CA2)
HZA780Hu 人乳铁传递蛋白(LTF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Lactoferrin (LTF)
HZA624Hu 人肝癌源性生长因子(HDGF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Hepatoma Derived Growth Factor (HDGF)