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细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:褐鼠胰岛素瘤上皮细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的褐鼠胰岛素瘤上皮细胞血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。褐鼠胰岛素瘤上皮细胞
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建褐鼠胰岛素瘤上皮细胞议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
HZE040Mu 小鼠围脂滴蛋白4(PLIN4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Perilipin 4 (PLIN4)
HZC448Mu 小鼠肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Dystrophin Associated Glycoprotein 1 (DAG1)
HZJ193Mu 小鼠双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1A(DYRK1A)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Dual Specificity Tyrosine Phosphorylation Regulated Kinase 1A (DYRK1A)
HZH922Mu 小鼠亨廷顿蛋白(HTT)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Huntingtin (HTT)
HZB366Mu 小鼠血管内皮钙黏蛋白(CDH5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cadherin 5 (CDH5)
HZA718Mu 小鼠β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(βACE1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Beta-Site APP Cleaving Enzyme 1 (bACE1)
HZD523Mu 小鼠90kDa热休克蛋白αA1(HSP90αA1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Heat Shock Protein 90kDa Alpha A1 (HSP90aA1)
HZJ374Mu 小鼠几丁质酶1(CHIT1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Chitinase 1 (CHIT1)
HZD206Mu 小鼠EB病毒诱导蛋白3(EBI3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Epstein Barr Virus Induced Protein 3 (EBI3)
HZB593Mu 小鼠淋巴细胞抗原75(LY75)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Lymphocyte Antigen 75 (LY75)
HZL920Mu 小鼠信号素3E(SEMA3E)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Semaphorin 3E (SEMA3E)
HZC843Mu 小鼠Sideroflexin 1蛋白(SFXN1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Sideroflexin 1 (SFXN1)
HZK247Mu 小鼠SRC/FGR/YES相关FYN癌基因(FYN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for FYN Oncogene Related To SRC/FGR/YES (FYN)
HZJ447Mu 小鼠染色质装配因子1亚基B(CHAF1B)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Chromatin Assembly Factor 1, Subunit B (CHAF1B)
HZL761Mu 小鼠氨酰tRNA合成酶复合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1 (AIMP1)
HZQ088Mu 小鼠Dickkopf相关蛋白4(DKK4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Dickkopf Related Protein 4 (DKK4)
HZL507Mu 小鼠序列相似家族3成员B(FAM3B)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Family With Sequence Similarity 3, Member B (FAM3B)
HZE707Mu 小鼠微管蛋白β1(TUBβ1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tubulin Beta 1 (TUBb1)
HZJ121Mu 小鼠F-框亮氨酸丰富重复蛋白3(FBXL3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for F-Box And Leucine Rich Repeat Protein 3 (FBXL3)
HZC470Mu 小鼠脂肪酸合酶(FASN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fatty Acid Synthase (FASN)
HZC852Mu 小鼠精胺氧化酶(SMOX)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Spermine Oxidase (SMOX)
HZH138Mu 小鼠丝氨酸棕榈酰转移酶长链碱性亚基1(SPTLC1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Serine Palmitoyltransferase, Long Chain Base Subunit 1 (SPTLC1)