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细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:狗肾细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清狗肾细胞,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加狗肾细胞热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物狗肾细胞
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
CES094Mu 小鼠免疫球蛋白G2α(IgG2α)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Immunoglobulin G2a (IgG2a)
HZE916Mu 小鼠沉默调节蛋白6(SIRT6)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Sirtuin 6 (SIRT6)
HZF419Mu 小鼠硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Stearoyl Coenzyme A Desaturase (SCD)
HZF180Mu 小鼠17-β-羟基类固醇脱氢酶10(HSD17β10)ELISA试剂盒 ELISA Kit for 17-Beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 10 (HSD17b10)
CEA747Mu 小鼠补体1q(C1q)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Complement 1q (C1q)
HZB092Mu 小鼠骨涎蛋白(BSP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bone Sialoprotein (BSP)
HZB331Mu 小鼠套膜蛋白(iNV)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Involucrin (iNV)
HZC020Mu 小鼠S100钙结合蛋白A4(S100A4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A4 (S100A4)
HZE252Mu 小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Indoleamine-2,3-Dioxygenase 2 (IDO2)
HZC963Mu 小鼠钙蛋白酶10(CAPN10)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Calpain 10 (CAPN10)
HZD539Mu 小鼠细胞色素P450家族成员27B1(CYP27B1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cytochrome P450 27B1 (CYP27B1)
HZG007Mu 小鼠腺苷A2b受体(ADORA2b)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Adenosine A2b Receptor (ADORA2b)
HZG475Mu 小鼠甘氨酸脱氢酶(GLDC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glycine Dehydrogenase (GLDC)
HZJ103Mu 小鼠丝聚蛋白(FLG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Filaggrin (FLG)
HZK072Mu 小鼠Zeste同源物增强子1(EZH1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Enhancer Of Zeste Homolog 1 (EZH1)
HZW764Mu 小鼠含亮氨酸丰富重复蛋白3C(LRRC3C)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Leucine Rich Repeat Containing Protein 3C (LRRC3C)
HZC615Mu 小鼠Bcl2相关髓细胞白血病序列1(MCL1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Myeloid Cell Leukemia Sequence 1, Bcl2 Related (MCL1)
HZA792Mu 小鼠拓扑异构酶Ⅱ(TOP2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Topoisomerase II (TOP2)
HZB592Mu 小鼠胱天蛋白酶1(CASP1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Caspase 1 (CASP1)
HZB837Mu 小鼠白介素2受体α(IL2Rα)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 2 Receptor Alpha (IL2Ra)
HZC019Mu 小鼠血小板激活因子乙酰水解酶2(PAFAH2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Platelet Activating Factor Acetylhydrolase 2 (PAFAH2)
HZD013Mu 小鼠X-射线修复交叉互补蛋白5(XRCC5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for X-Ray Repair Cross Complementing 5 (XRCC5)
CED066Mu 小鼠Apelin蛋白(APLN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Apelin (APLN)