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细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:狗肾细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后狗肾细胞再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加狗肾细胞热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清狗肾细胞会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
HZB477Mu 小鼠基质Gla蛋白(MGP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Matrix Gla Protein (MGP)
HZB785Mu 小鼠脑啡肽酶(NEP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Neprilysin (NEP)
HZE773Mu 小鼠免疫缺陷伴血小板减少综合征蛋白家族成员2(WASF2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Wiskott Aldrich Syndrome Protein Family, Member 2 (WASF2)
HZE906Mu 小鼠组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Histone Deacetylase 6 (HDAC6)
HZB016Mu 小鼠血小板膜糖蛋白Ⅰbβ多肽(GP2Bβ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glycoprotein Ib Beta Polypeptide, Platelet (GP1Bb)
HZA226Mu 小鼠游离脂肪酸受体3(FFAR3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Free Fatty Acid Receptor 3 (FFAR3)
HZE380Mu 小鼠囊泡谷氨酸转运蛋白1(VGLUT1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Vesicular Glutamate Transporter 1 (VGLUT1)
HZG766Mu 小鼠Crk样蛋白(CRKL)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Crk Like Protein (CRKL)
HZB626Mu 小鼠白介素10受体α(IL10Rα)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 10 Receptor Alpha (IL10Ra)
HZC949Mu 小鼠游离脂肪酸受体2(FFAR2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Free Fatty Acid Receptor 2 (FFAR2)
HZA397Mu 小鼠转化生长因子β受体Ⅰ(TGFβR1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor I (TGFbR1)
HZB171Mu 小鼠转铁蛋白受体(TFR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Transferrin Receptor (TFR)
HZA931Mu 小鼠蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICK1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Protein Interacting With Protein Kinase C Alpha 1 (PICK1)
HZD664Mu 小鼠乙酰辅酶A乙酰转移酶1(ACAT1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 1 (ACAT1)
HZC688Mu 小鼠骨诱导因子(OGN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Osteoglycin (OGN)
HZE585Mu 小鼠B-细胞淋巴瘤因子9(Bcl9)ELISA试剂盒 ELISA Kit for B-Cell CLL/Lymphoma 9 (Bcl9)
HZD665Mu 小鼠乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2 (ACAT2)
HZG547Mu 小鼠Yes关联蛋白1(YAP1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Yes Associated Protein 1 (YAP1)
CEA898Mu 小鼠α-骨胶原交联(αCTx)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Alpha-Crosslaps (aCTx)