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细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:肝瘤血管内皮细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂肝瘤血管内皮细胞家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。肝瘤血管内皮细胞
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。肝瘤血管内皮细胞
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
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(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
HZA227Ga 鸡亲环素B(CYPB)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cyclophilin B (CYPB)
HZA078Ga 鸡白介素5(IL5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 5 (IL5)
HZA259Ga 鸡膜联蛋白A5(ANXA5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5)
HZA263Ga 鸡线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A)
HZA228Ga 鸡抗缪勒管激素(AMH)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Anti-Mullerian Hormone (AMH)
HZA267Ga 鸡组织蛋白酶K(CTSK)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK)
HZA093Ga 鸡巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta (MIP1b)
HZA277Ga 鸡间隙连接蛋白43(CX43)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Connexin 43 (CX43)
HZA278Ga 鸡踝蛋白(TLN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Talin (TLN)
HZA099Ga 鸡基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)
HZA281Ga 鸡B-细胞激活因子受体(BAFFR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for B-Cell Activation Factor Receptor (BAFFR)
HZA284Ga 鸡肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Heparin Cofactor II (HCII)
HZA282Ga 鸡组蛋白H2A(H2A)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Histone H2A (H2A)
HZA292Ga 鸡α-胞衬蛋白(SPTAN1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Alpha-Fodrin (SPTAN1)
HZA008Ga 鸡血管生成素1(ANGPT1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Angiopoietin 1 (ANGPT1)
HZA011Ga 鸡脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)
HZA010Ga 鸡结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)
HZA013Ga 鸡骨成型蛋白2(BMP2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)
HZA014Ga 鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)
HZA021Ga 鸡睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF)