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细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:肝癌亚力山大细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于肝癌亚力山大细胞-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已完全解肝癌亚力山大细胞冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物肝癌亚力山大细胞
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
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(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
HZA017Ga 鸡上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE)
HZA032Ga 鸡酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1)
HZA009Ga 鸡血管生成素2(ANGPT2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Angiopoietin 2 (ANGPT2)
HZA034Ga 鸡成纤维细胞生长因子4(FGF4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 4 (FGF4)
HZA036Ga 鸡成纤维细胞生长因子9(FGF9)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9)
HZA605Ga 鸡脂联素(ADP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Adiponectin (ADP)
HZA543Ga 鸡免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Immunoglobulin M (IgM)
HZA380Ga 鸡血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)
HZB827Ga 鸡轴突生长诱向因子1(Ntn1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Netrin 1 (Ntn1)
CEA991Ga 鸡饥饿素(GHRL)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Ghrelin (GHRL)
CEA005Ga 鸡血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Angiotensin II (AngII)
HZA861Ga 鸡补体成分3(C3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Complement Component 3 (C3)
HZB480Ga 鸡甘露糖结合蛋白(MBL)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Mannose Binding Lectin (MBL)
HZA641Ga 鸡分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Secretory Immunoglobulin A (sIgA)
HZA873Ga 鸡热休克蛋白70(HSP70)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Heat Shock Protein 70 (HSP70)
HZA053Ga 鸡胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2)
HZA471Ga 鸡骨钙素(OC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Osteocalcin (OC)
HZA073Ga 鸡白介素2(IL2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 2 (IL2)
HZA077Ga 鸡白介素4(IL4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 4 (IL4)
HZA108Ga 鸡骨保护素(OPG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Osteoprotegerin (OPG)
HZA214Ga 鸡窖蛋白(CAV1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Caveolin 1 (CAV1)
HZA135Ga 鸡血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thrombopoietin (TPO)
HZA147Ga 鸡脂联素受体1(ADIPOR1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Adiponectin Receptor 1 (ADIPOR1)
HZA164Ga 鸡泛素(Ub)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Ubiquitin (Ub)
HZA063Ga 鸡白介素17(IL17)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 17 (IL17)