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细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:非洲绿猴肾细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次非洲绿猴肾细胞的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要非洲绿猴肾细胞长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。非洲绿猴肾细胞
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
hz-E11327 人抗滋养膜细胞抗体(ATA)ELISA试剂盒 Human anti-trophoblast antibody,ATA ELISAkit
hz-E11328 人抗透明带抗体(aZP)ELISA试剂盒 Human anti-zona pellucida antibody,aZP ELISAkit
hz-E11329 人抗卵巢抗体(AOAb)ELISA试剂盒 Human Anti-Ovary Antibody,AOAb ELISAkit
hz-E11330 人抗巨细胞病毒抗体IgG(anti-CMV IgG)ELISA试剂盒 Human anti-cytomegalovirus IgG antibody,anti-CMV IgG ELISAkit
hz-E11331 人碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒 Human basic fetoprotein,BFP ELISAkit
hz-E11332 人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RV IgM)ELISA试剂盒 Human anti-rubella virus IgM antibody,anti-RV IgM ELISAkit
hz-E11333 人催产素(OT)ELISA试剂盒 Human oxytocin,OT ELISAkit
hz-E11334 人妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒 Human pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A ELISAkit
hz-E11335 人抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA试剂盒 Human Endometrium Antibody,EMAb ELISAkit
hz-E11336 人抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒 Human anti-sperm antibody,AsAb ELISAkit
hz-E11337 人妊娠疱疹抗体(HG)ELISA试剂盒 Human Herpes Gestation,HG ELISAkit
hz-E11338 人胎盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒 Human placenta growth factor,PLGF ELISAkit
hz-E11339 小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒 Mouse FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISAkit
hz-E11340 小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒 Mouse glucoprotein 130,gp130 ELISAkit
hz-E11341 小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 Mouse Interferon γ ,IFN-γ ELISAkitKit
hz-E11342 小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒 Mouse Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISAkit
hz-E11343 小鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 Mouse Interleukin 13,IL-13 ELISAkit
hz-E11344 小鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒 Mouse Interleukin 18,IL-18 ELISAkit
hz-E11345 人凝血酶(TM)ELISA试剂盒 Human Thrombin,TM ELISAkit
hz-E11346 人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA试剂盒 Human coagulation factor Ⅶ,FⅦ ELISAkit
hz-E11347 人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISA试剂盒 Human soluble human leucocyte antigen G1,sHLA-G ELISAkit
hz-E11348 人凝血酶原(PT)ELISA试剂盒 Human Prothrombin,PT ELISAkit