ELISA 技术的操作要点

ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

血清标本可按常规方法采集，应留意避免溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。ELISA的操纵因固相载体的形成不同而有所差异，海内医学检修一般均用板式点。

标本的采取和保留

可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保留作多次检测，宜少量分装冰存。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。如在冰箱中保留过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA 中可使本底加深。保留血清自采集时就应留大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒意无菌操纵，也可加入适当防腐剂。除特殊情况外，在医学检修中均以血清作为检测标本。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点，珠式、管式及磁性球ELISA，进口ELISA试剂盒均与特殊仪器配合应用，两者均有具体的使用说明，严格遵照划定操纵，必能得出正确的结果。

优质的试剂，良好的仪器和准确的操纵是保证ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要前提。血清标本宜在新鲜时检测。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同即是血清。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP ，也会产生假阳性反应。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血块收缩后即可取得。大部门ELISA检测均以血大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒清为标本。在ELISA中血浆和血清可平等应用。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

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