实验原理

大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)水平。用纯化的大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)，再与HRP 标记的大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)浓度。

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的O大鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA试剂盒D 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月

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