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在小鼠颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,小鼠颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Amylase Beta (Amyb) 人淀粉酶β(Amyβ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Carbonic Anhydrase II (CA2) 人碳酸酐酶Ⅱ(CA2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Lactoferrin (LTF) 人乳铁传递蛋白(LTF)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Hepatoma Derived Growth Factor (HDGF) 人肝癌源性生长因子(HDGF)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Elastase 2, Neutrophil (ELA2) 人中性粒细胞弹性蛋白酶(ELA2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for BH3 Interacting Domain Death Agonist (Bid) 人BH3相互作用域死亡激动剂(Bid)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Caspase 5 (CASP5) 人胱天蛋白酶5(CASP5)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16) 人趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a) 人糖原合酶激酶3α(GSK3α)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Pyruvate Dehydrogenase Alpha (PDHa) 人丙酮酸脱氢酶α(PDHα)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Hexokinase 1 (HK1) 人己糖激酶1(HK1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Midkine (MK) 人中期因子(MK)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 1 (GSTa1) 人谷胱甘肽S转移酶α1(GSTα1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 5 (GSTa5) 人谷胱甘肽S转移酶α5(GSTα5)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for C-Type Natriuretic Peptide (CNP) 人C-型钠尿肽(CNP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Hexosaminidase B Beta (HEXb) 人氨基己糖苷酶Bβ(HEXβ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Complement Factor H (CFH) 人补体因子H(CFH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Trypsinogen Activation Peptide (TAP) 人胰蛋白酶原激活肽(TAP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 7 (FGF7) 人成纤维细胞生长因子7(FGF7)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Visfatin (VF) 人内脂素(VF)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for High Density Lipoprotein (HDL) 人高密度脂蛋白(HDL)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Low Density Lipoprotein Receptor (LDLR) 人低密度脂蛋白受体(LDLR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Low Density Lipoprotein Receptor Related 人低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)检测试剂盒96t/48t