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在小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 1 (ADH1) 人乙醇脱氢酶1(ADH1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vitamin D Binding Protein (DBP) 人维生素D结合蛋白(DBP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Versican (VS) 人多功能蛋白聚糖(VS)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 人血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Regenerating Islet Derived Protein 4 (REG4) 人再生胰岛衍生蛋白4(REG4)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Keratin 17 (KRT17) 人角蛋白17(KRT17)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Netrin 1 (Ntn1) 人轴突生长诱向因子1(Ntn1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Netrin 4 (Ntn4) 人轴突生长诱向因子4(Ntn4)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Apolipoprotein A4 (APOA4) 人载脂蛋白A4(APOA4)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloprotease 9 (ADAM9) 人解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Transglutaminase 2, Tissue (TGM2) 人组织转谷氨酰胺酶(TGM2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Hedgehog Homolog, Sonic (SHH) 人音猬因子(SHH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 12 (IL12) 人白介素12(IL12)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Complement Factor D (CFD) 人补体因子D(CFD)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Coagulation Factor XI (F11) 人凝血因子Ⅺ(F11)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vinculin (VCL) 人纽蛋白(VCL)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Inhibitory Subunit Of NF Kappa B Alpha (IkBa) 人核因子κB抑制因子α(IκBα)检测试剂盒96t/48t
小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒ELISA Kit for Beta-1,4-Galactosyltransferase 1 (b4GALT1) 人β-1,4-半乳糖转移酶1(β4GALT1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGFA) 人血管内皮生长因子A(VEGFA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Rho Associated Coiled Coil Containing Protein 人含Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)检测试剂盒96t/48t