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在小鼠阻抑素(PHB)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,小鼠阻抑素(PHB)检测试剂盒在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠阻抑素(PHB)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠阻抑素(PHB)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Envoplakin (EVPL) 人外皮蛋白(EVPL)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Adiponectin Receptor 1 (ADIPOR1) 人脂联素受体1(ADIPOR1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor Receptor 1 (FGFR1) 人成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Lymphocyte Cytosolic Protein 1 (LCP1) 人淋巴细胞胞浆蛋白1(LCP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Creatine Kinase, Brain (CKB) 人脑型肌酸激酶(CKB)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Platelet Derived Growth Factor AA (PDGFAA) 人血小板衍生生长因子AA(PDGFAA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Extracellular Matrix Protein 1 (ECM1) 人细胞外基质蛋白1(ECM1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 10 (FGF10) 人成纤维细胞生长因子10(FGF10)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Anti-Smooth Muscle Antibody (ASMA) 人抗平滑肌抗体(ASMA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 6 人胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Inhibin Binding Protein (INHBP) 人抑制素结合蛋白(INHBP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Transportin 1 (TNPO1) 人转运蛋白1(TNPO1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Urocortin 1 (UCN1) 人尿皮质素1(UCN1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8) 人70kDa热休克蛋白8(HSPA8)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Anti-Glutamic Acid Decarboxylase Antibodies 人抗谷氨酸脱羧酶抗体(Anti-GAD)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Galectin 2 (GAL2) 人半乳糖凝集素2(GAL2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Galectin 4 (GAL4) 人半乳糖凝集素4(GAL4)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Protein Kinase C Eta (PKCh) 人蛋白激酶Cη(PKCη)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Aromatase (ARO) 人芳香酶(ARO)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Procollagen II N-Terminal Propeptide (PIINP) 人Ⅱ型前胶原氨基端原肽(PⅡNT)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Galectin 8 (GAL8) 人半乳糖凝集素8(GAL8)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Doublecortin (DCX) 人双肾上腺皮质激素(DCX)检测试剂盒96t/48t