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在小鼠叉头框蛋白A2(FOXA2)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,小鼠叉头框蛋白A2(FOXA2)检测试剂盒在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠叉头框蛋白A2(FOXA2)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠叉头框蛋白A2(FOXA2)检测试剂盒相关如下:
Human pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISAkit 人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)检测试剂盒96t/48t
Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)检测试剂盒96t/48t
Human Interferon β,IFN-β/IFNB ELISAkit 人β干扰素(IFN-β/IFNB)检测试剂盒96t/48t
Human Soluble Cluster of differentiation 38,sCD38 ELISAkit 人可溶性CD38(sCD38)检测试剂盒96t/48t
Human Soluble Cluster of differentiation 21,sCD21 ELISAkit 人可溶性CD21(CR2/sCD21)检测试剂盒96t/48t
Human Leptin Soluble Receptor,sLR ELISAkit 人可溶性瘦素受体(sLR)检测试剂盒96t/48t
Human Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISAkit 人Toll样受体9(TLR-9/CD289)检测试剂盒96t/48t
Human transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISAkit 人转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒96t/48t
Human monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISAkit 人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒96t/48t
Human leukotriene D4,LT-D4 ELISAkit 人白三烯D4(LTD4)检测试剂盒96t/48t
Human Neural-Cadherin, N-Cad ELISAkit 人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)检测试剂盒96t/48t
Human erythropoiesis stimulating factor,ESF ELISAkit 人红细胞刺激因子(ESF)检测试剂盒96t/48t
Human TNF related activation induced cytokine,TRANCE 人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)检测试剂盒96t/48t
Human growth hormone relasing factor,GH-RF ELISAkit 人生长激素释放因子(GH-RF)检测试剂盒96t/48t
Human macrophage chemotatic factor,MCF ELISAkit 人巨噬细胞趋化因子(MCF)检测试剂盒96t/48t
Human Interferon α/βReceptor,IFN-α/βR ELISAkit 人α/β干扰素受体(IFN-α/βR)检测试剂盒96t/48t
Human B cell growth protein,BCGF ELISAkit 人B细胞生长因子(BCGF)检测试剂盒96t/48t
Human B cell differetiation factor,BCDF ELISAkit 人B细胞分化因子(BCDF)检测试剂盒96t/48t
Human Epithelial Cell Adhesion Molecule,Ep-CAM ELISAkit 人上皮细胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)检测试剂盒96t/48t