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在小鼠肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,小鼠肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)检测试剂盒在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)检测试剂盒相关如下:
Human cardiac ankyrin repeat domain 1,ANKRD1 ELISAkit 人心肌锚蛋白重复域1(ANKRD1)检测试剂盒96t/48t
Human Leptin Receptor,LEPR ELISAkit 人瘦素受体(LEPR)检测试剂盒96t/48t
Human Angiotensin Ⅱ Receptor 2,AT2R ELISAkit 人血管紧张素Ⅱ受体2(AT2R)检测试剂盒96t/48t
Human angiotension Ⅱ receptor 1,ANGⅡR-1 ELISAkit 人血管紧张素Ⅱ受体1(ANGⅡR-1)检测试剂盒96t/48t
Human Angiopoietin 4,ANG-4 ELISAkit 人血管生成素4(ANG-4)检测试剂盒96t/48t
Human soluble myosin heavy chain 1,sMHC-1 ELISAkit 人可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)检测试剂盒96t/48t
Human Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISAkit 人热休克因子1(HSF-1)检测试剂盒96t/48t
Human vasopeptidase inhibitors,VPI ELISAkit 人血管活性肽酶抑制剂(VPI)检测试剂盒96t/48t
Human Cardiac myosin-light chains 1,CMLC-1 ELISAkit 人心肌肌凝蛋白轻链1(CMLC-1)检测试剂盒96t/48t
Human Ischemia Modified Albumin,IMA ELISAkit 人缺血修饰白蛋白(IMA)检测试剂盒96t/48t
Human 8-epi-prostaglandin F2alpha,8-epi-PGF2α ELISAkit 人8-异构前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)检测试剂盒96t/48t
Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISAkit 人血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)检测试剂盒96t/48t
Human α-Smooth muscle actin,α-SMA ELISAkit 人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)检测试剂盒96t/48t
Human α-sarcomeric actin,α-SCA ELISAkit 人α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)检测试剂盒96t/48t
Human smooth muscle Myosin,SMM ELISAkit 人平滑肌肌球蛋白(SMM)检测试剂盒96t/48t
Human cardiac isoform of Tropnin T,cTnT ELISAkit 人心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)检测试剂盒96t/48t
Human myosin heavy chain,MHC ELISAkit 人肌球蛋白重链(MHC)检测试剂盒96t/48t
Human heat shock protein 27,HSP-27 ELISAkit 人热休克蛋白27(HSP-27)检测试剂盒96t/48t
Human angiostatin,ANG ELISAkit 人血管抑素/血管稳定蛋白(ANG)检测试剂盒96t/48t