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人β-1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶2(β4GALNT2)ELISA试剂盒加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶标记物。
解决办法:请按照操作步骤进行。
b.原因:试剂盒内容物未能充分回。
解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因:室温太低。
解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。
d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因:人β-1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶2(β4GALNT2)ELISA试剂盒已过有效期限。
解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。
2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。
a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。人β-1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶2(β4GALNT2)ELISA试剂盒技术要点包括三个方面:试剂的制备、反应条件的选择和操作的标准化。
(1)抗体免疫球蛋白用包被缓冲液稀释至蛋白浓度为10、1和0.1μg/ml,分别在ELISA板上进行包被,每一浓度包括三个纵行,洗涤。
(2)在一个横行各包被孔中加入强阳性抗原液,另一横行加入弱阳性抗原液,第三横行加入阴性对照液,保温,洗涤。
(3)将酶标抗体用稀释液稀释成三个浓度,例如1:1000、1:5000和1:25000。分别加入每一包被浓度的一个纵行中,保温,洗涤。
(4)加底物显色。加酸终止反应后,读取A值。
(5)以强阳性抗原的A值在0.8左右、阴性参考的A值小于0.1的条件作最适条件,据此选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。从表15-2可看出包被抗体浓度可选用1μg/ml,酶标抗体的稀释度可选为1:5000。为了进一步节省试剂,可以此浓度为基点,缩小间距再做进一步的棋盘滴定。
人β-1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶2(β4GALNT2)ELISA试剂盒相关如下:
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