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在小鼠转化受体电位阳离子通道亚家族V成员1(TRPV1)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,小鼠转化受体电位阳离子通道亚家族V成员1(TRPV1)检测试剂盒观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠转化受体电位阳离子通道亚家族V成员1(TRPV1)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠转化受体电位阳离子通道亚家族V成员1(TRPV1)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for YY1 Transcription Factor (YY1) 人YY1转录因子(YY1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ribosomal Protein L13A (RPL13A) 人核糖体蛋白L13A(RPL13A)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Reactive Oxygen Species Modulator 1 (ROMO1) 人活性氧物种调节因子1(ROMO1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Brain Protein 44 Like Protein(BRP44L) 人脑蛋白44样蛋白(BRP44L)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Amyloid Beta Precursor Like Protein 1 (APLP1) 人淀粉样蛋白β前体样蛋白1(APLP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glutamate Receptor, Ionotropic, 人N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2D(GRIN2D)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glutamate Receptor, Ionotropic, 人N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2C(GRIN2C)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glutamate Receptor, Ionotropic, 人N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2B(GRIN2B)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Poliovirus Receptor Related Protein 1 (PVRL1) 人脊髓灰质炎病毒受体相关分子1(PVRL1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ubiquitin Conjugating Enzyme E2L3 (UBE2L3) 人泛素结合酶E2C结合蛋白E2L3(UBE2L3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Sphingosine-1-Phosphate Phosphatase 1 (SGPP1) 人鞘氨醇-1-磷酸磷酸酶1(SGPP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Small Heterodimer Partner (SHP) 人小异二聚体伴侣(SHP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Methyl CpG Binding Protein 2 (MECP2) 人甲基CpG结合蛋白2(MECP2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Excitatory Amino Acid Transporter 3 (EAAT3) 人兴奋性氨基酸转运蛋白3(EAAT3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ryanodine Receptor 1, Skeletal (RYR1) 人兰尼定受体1(RYR1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Death Inducer Obliterator 1 (DIDO1) 人死亡诱导终结因子1(DIDO1)检测试剂盒96t/48t