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小鼠细胞外基质蛋白1(ECM1)检测试剂盒中加样须注意如下问题:
1. 吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确!
2. 不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确!
正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入,应注意:
1. 角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确!
2. 吸头应当贴着管壁和液面的交界处!
在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中,如以TMB为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以OPD为底物,则试剂盒提供OPD片剂或粉剂,临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15~30分钟。从理论上说,37℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全,尽管在最初的10分钟内,绝大部份催化反应即可完成。因此,为使弱阳性样本孔能有充分的显色,建议在37℃下反应25~30分钟后,终止反应比色测定。
此外,小鼠细胞外基质蛋白1(ECM1)检测试剂盒在加入底物开始显色反应前,最好是先检查一下底物溶液的有效性,即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppendorf管中,观察是否有显色出现,如有,则说明底物已变质。以OPD为底物,配好后应为无色,否则就不能使用。以TMB为底物,整个显色反应过程无需避光,而以OPD为底物,则需避光进行。关于TMB和OPD的显色反应特点及注意点可参考前面有关章节内容。显色反应完成后,加入酸终止反应,振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。
1.3 正态分布及标准差 ELISA试验中,检验同一样本达20次以上时,就会发现这组数据(指测定结果的吸光值)分布在均值两侧,大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标,以出现的频率为纵坐标作图,就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1,钟顶处为均值,其他值以均值为中心对称分布,这就是正态分布。 正态曲线以下的面积称概率,常用样本的均数(X)和标准差(SD)来表示,其计算方法如下: 均值、标准差和概率的关系如下: X±1SD,概率0.68 X±2SD,概率0.95 X±3SD,概率0.99 换言之,当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据,其中靠近均值(X)的±1SD范围内的数据,小鼠细胞外基质蛋白1(ECM1)检测试剂盒占该组数据的68%,在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%,在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时,将有95%的数据可能合格。
优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条
件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。
本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试
剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出
准确的结果。
小鼠细胞外基质蛋白1(ECM1)检测试剂盒相关产品系列表:
Human anti-IgE receptor antibody ELISAkit 人抗IgE受体抗体检测试剂盒96t/48t
Human anti-IVIgG antibody ELISAkit 人抗IVIgG抗体检测试剂盒96t/48t
Human Anti-myocardial antibody,AMA ELISAkit 人抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒96t/48t
human Anti-Thyroid Microsome Antibody,ATMA/TMAB ELISAkit 人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA/TMAB)检测试剂盒96t/48t
human Anti-Thyroid Microsome Antibody,ATMA/TMAB ELISAkit 人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)检测试剂盒96t/48t
human glutamic acid decarboxylase autoantibody,GAD-Ab 人谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)检测试剂盒96t/48t
Human platelet antibodies IgG/M/A,PA-IgG/M/A ELISAkit 人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)检测试剂盒96t/48t
Human anti-lymphocyte globulin,ALG ELISAkit 人抗淋巴细胞球蛋白(ALG)检测试剂盒96t/48t
Human Anti-trypsin,AT ELISAkit 人抗胰蛋白酶(AT)检测试剂盒96t/48t
Human anti-ribosomal P protein antibody,ARPA/Rib-P ELISAkit 人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)检测试剂盒96t/48t
Human Anti-Somatic Muscle Antibody,ASA ELISAkit 人抗骨骼肌抗体(ASA)检测试剂盒96t/48t
Human Thyroid Antibody,TAb ELISAkit 人甲状腺抗体(TAb)检测试剂盒96t/48t
Human islet cell antibody,ICA ELISAkit 人胰岛细胞抗体(ICA)检测试剂盒96t/48t
Human salivary duct autoantibody,SDA ELISAkit 人抗唾液腺导管组织抗体(SDA)检测试剂盒96t/48t
Human mitotic spindle apparatus antibody,MSA ELISAkit 人抗纺锤体抗体(MSA)检测试剂盒96t/48t
Human Anti-keratin antibody,AKA ELISAkit 人抗角蛋白抗体(AKA)检测试剂盒96t/48t
Human Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody,pANCA 人抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)检测试剂盒96t/48t
human anti-neutrophil cytoplasmic antibody,cANCA ELISAkit 人抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)检测试剂盒96t/48t
Human anti-prothrombins antibodies,aPT1/aPT2 ELISAkit 人抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)检测试剂盒96t/48t
human phosphatidylinositol antibody IgG/IgM,PI Ab- 人磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)检测试剂盒96t/48t
Human β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 人β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)检测试剂盒96t/48t
Human Cathepsin Antibodies,Cath Ab ELISAkit 人组织蛋白酶抗体(Cath Ab)检测试剂盒96t/48t
Human Lactoferrin antibody IgG,LF/LTF Ab-IgG ELISAkit 人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白抗体IgG(LF/LTF Ab-Ig)检测试剂盒96t/48t