温育是小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。

温育这一步是临床小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

（1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37℃下足够的温育时间，小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。

（2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2～8℃下反应24小时。较高的反应温度，由于分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此，我们建议在临床小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

（3）“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深，产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规 ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

总而言之，在临床小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒测定中，要保证好的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。

hzF663Hu 人核因子I/B(NFIB)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Nuclear Factor I/B (NFIB) 

hzG619Hu 人芳基硫酸酯酶A(ARSA)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Arylsulfatase A (ARSA) 

hzG693Hu 人GA结合蛋白转录因子α(GABPα)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for GA Binding Protein Transcription Factor Alpha (GABPa) 

hzH176Hu 人SH3域结合蛋白2(SH3BP2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for SH3 Domain Binding Protein 2 (SH3BP2) 

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hzH781Hu 人含免疫球蛋白超家族亮氨酸丰富重复蛋白(ISLR)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Immunoglobulin Superfamily Containing Leucine Rich Repeat Protein (ISLR) 

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hzA821Hu 人抗C反应蛋白抗体(Anti-CRP)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Anti-C Reactive Protein Antibody (Anti-CRP) 

hzL139Hu 人尼曼病蛋白C2(NPC2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Niemann Pick Disease Type C2 (NPC2) 

hzM085Hu 人核糖体蛋白S6激酶α1(RPS6Kα1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Ribosomal Protein S6 Kinase Alpha 1 (RPS6Ka1) 

hzL286Hu 人钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(CAMKK2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase Kinase 2 (CAMKK2) 

hzQ209Hu 人ATP结合盒转运蛋白C10(ABCC10)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C10 (ABCC10) 

hzT801Hu 人Scleraxis同源物B(SCXB)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Scleraxis Homolog B (SCXB) 

hzA346Hu 人食欲素(OX)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Orexin (OX) 

hzE620Hu 人周期素依赖性激酶16(CDK16)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Cyclin Dependent Kinase 16 (CDK16) 

hzD622Hu 人ATP结合盒转运蛋白C2(ABCC2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C2 (ABCC2) 

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hzC673Hu 人氨基端前C-型利钠肽(NT-ProCNP)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for N-Terminal Pro C-Type Natriuretic Peptide (NT-ProCNP) 

hzD629Hu 人ATP结合盒转运蛋白C9(ABCC9)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C9 (ABCC9) 

hzD628Hu 人ATP结合盒转运蛋白C8(ABCC8)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C8 (ABCC8) 

hzD626Hu 人ATP结合盒转运蛋白C6(ABCC6)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C6 (ABCC6) 

hzD625Hu 人ATP结合盒转运蛋白C5(ABCC5)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C5 (ABCC5) 

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