温育是小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)检测试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。

温育这一步是临床小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

（1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37℃下足够的温育时间，小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。

（2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2～8℃下反应24小时。较高的反应温度，由于分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此，我们建议在临床小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

（3）“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深，产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规 ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

总而言之，在临床小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)检测试剂盒测定中，要保证好的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。

hzA641Hu 人分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Secretory Immunoglobulin A (sIgA)

hzA693Hu 人27kDa热休克蛋白(HSPB1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Heat Shock 27kDa Protein 1 (HSPB1)

hzA644Hu 人CCAAT增强子结合蛋白α(HZBPα)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for CCAAT/EnhanHZr Binding Protein Alpha (HZBPa)

hzA691Hu 人激肽释放酶6(KLK6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Kallikrein 6 (KLK6)

hzA690Hu 人激肽释放酶8(KLK8)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Kallikrein 8 (KLK8)

hzA645Hu 人晚期糖基化终末产物受体(AGER)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for AdvanHZd Glycosylation End Product Specific ReHZptor (AGER)

hzB288Hu 人ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter G1 (ABCG1)

hzB290Hu 人V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog (MYC)

hzB291Hu 人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS)

hzC921Hu 人血小板衍生生长因子B(PDGFB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Platelet Derived Growth Factor Subunit B (PDGFB)

hzA728Hu 人环加氧酶1(PTGS1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prostaglandin Endoperoxide Synthase 1 (PTGS1)

hzA646Hu 人骨形成蛋白6(BMP6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 6 (BMP6)

hzA651Hu 人透明质酸结合蛋白1(HABP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Hyaluronan Binding Protein 1 (HABP1)

hzA687Hu 人钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calretinin (CR)

hzB298Hu 人肾上腺素能受体α1A(ADRα1A)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adrenergic ReHZptor Alpha 1A (ADRa1A)

hzB299Hu 人多巴胺受体D1(DRD1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Dopamine ReHZptor D1 (DRD1)

hzB301Ge 人不对称二甲基精氨酸(ADMA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Asymmetrical Dimethylarginine (ADMA)

hzB302Hu 人野鼠色基因相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Agouti Related Protein (AGRP)

hzB303Hu 人集聚蛋白(AGRN)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Agrin (AGRN)

hzB304Hu 人补体C5转化酶(C5c)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Complement C5 Convertase (C5c)

hzB305Hu 人补体成分4b(C4b)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Complement Component 4b (C4b)

hzB309Hu 人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Pleiotrophin (PTN)

hzB310Hu 人弹性蛋白酶4(ELA4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Elastase 4 (ELA4)

hzB311Hu 人阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Proopiomelanocortin (POMC)