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尽管ELISA测定的操作步骤非常简单,人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒但有可能会影响测定结果的因素却较多,分布在测定操作的各步之中,尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因,特对常见问题及原因归纳总结于下表。
人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒问题可能的原因(非试剂盒本身的原因)
一.弱阳性质控样本检测不出
温育的时间或温度不够;显色反应时间太短;所用配制缓冲液的蒸馏水有问题
二.测定的重复性差(相同样本两次测定结果不一致)
这是典型的由测定操作引起的问题,包括:(1)加样本及试剂量不准;孔间不一致;(2)加样过快,孔间发生污染;(3)加错样本;(4)加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区;(5)不同批号试剂盒中组分混用;(6)人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒温育时间、洗板、显色时间不一致;(7)孔内污染杂物;(8)酶标仪滤光片不正确;(9)血清标本未完全凝固即加入,反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞,易出现假阳性反应等。
三.白板(阳性对照不显色)
(1)漏加酶结合物;
(2)洗板液配制中出现问题,如量筒不干净,含酶抑制物(如叠氮钠)等。
(3)漏加显色剂A或B;
(4)终止剂当显色剂使用。
四.全部板孔均有显色
(1)洗板不干净;
(2)显色液变质;
(3)加底物的吸光受酶污染;
(4)洗板液受酶等污染。
使用微量加样器加样必须注意的关键点是:人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象,这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附,从而引起非特异显色。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致.
HZH326Hu ELISA Kit for Protein Phosphatase, Mg2+/Mn2+ Dependent 1A 人Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)检测试剂盒
(PPM1A)
HZA173Hu ELISA Kit for Meprin A Beta (MEP1b) 人甲基多巴1β(MEP1β)检测试剂盒
HZQ217Hu ELISA Kit for ATPase, Na+/K+ Transporting Beta 4 Polypeptide 人钠/钾离子转运ATP酶β4肽(ATP1β4)检测试剂盒
人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒
(ATP1b4)
HZG920Hu ELISA Kit for UDP Glucuronosyltransferase 1 Family, 人UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A1(UGT1A1)检测试剂盒
Polypeptide A1 (UGT1A1)
HZC271Hu ELISA Kit for 5-Hydroxytryptamine Receptor 1A (HTR1A) 人5-羟色胺受体1A(HTR1A)检测试剂盒
HZL300Hu ELISA Kit for CD5 Antigen Like Protein (CD5L) 人CD5抗原样蛋白(CD5L)检测试剂盒
HZC370Hu ELISA Kit for Caudal Type Homeobox Transcription Factor 2 (CDX2) 人尾型同源框转录因子2(CDX2)检测试剂盒
HZC305Hu ELISA Kit for Cholinergic Receptor, Nicotinic, Alpha 7 (CHRNa7) 人烟碱型胆碱受体α7(CHRNα7)检测试剂盒
HZD143Hu ELISA Kit for Cholinergic Receptor, Nicotinic, Alpha 3 (CHRNa3) 人烟碱型胆碱受体α3(CHRNα3)检测试剂盒
HZH364Hu ELISA Kit for Palate/Lung And Nasal Epithelium Associated 人腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒
Protein (PLUNC)
HZJ729Hu ELISA Kit for GLI Family Zinc Finger Protein 1 (GLI1) 人GLI家族锌指蛋白1(GLI1)检测试剂盒
HZG302Hu ELISA Kit for Absent In Melanoma 2 (AIM2) 人黑素瘤缺乏因子2(AIM2)检测试剂盒
HZB148Hu ELISA Kit for Membrane Spanning 4 Domains Subfamily A, Member 1 人跨膜4域亚家族A成员1(MS4A1)检测试剂盒
(MS4A1)
HZG386Hu ELISA Kit for ATPase, Cu++ Transporting Beta Polypeptide 人铜离子转运ATP酶β肽(ATP7β)检测试剂盒
(ATP7b)
HZL947Hu ELISA Kit for Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like 人红细胞衍生核因子2样蛋白2(NFE2L2)检测试剂盒