尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，人肝配蛋白A5 (EFNA5)检测试剂盒但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。

人肝配蛋白A5 (EFNA5)检测试剂盒问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）

一．弱阳性质控样本检测不出

温育的时间或温度不够；显色反应时间太短；所用配制缓冲液的蒸馏水有问题

二．测定的重复性差（相同样本两次测定结果不一致）

这是典型的由测定操作引起的问题，包括：（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致；（2）加样过快，孔间发生污染；（3）加错样本；（4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；（5）不同批号试剂盒中组分混用；（6）人肝配蛋白A5 (EFNA5)检测试剂盒温育时间、洗板、显色时间不一致；（7）孔内污染杂物；（8）酶标仪滤光片不正确；（9）血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。

三．白板（阳性对照不显色）

（1）漏加酶结合物；

（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如叠氮钠）等。

（3）漏加显色剂A或B；

（4）终止剂当显色剂使用。

四．全部板孔均有显色

（1）洗板不干净；

（2）显色液变质；

（3）加底物的吸光受酶污染；

（4）洗板液受酶等污染。

使用微量加样器加样必须注意的关键点是：人肝配蛋白A5 (EFNA5)检测试剂盒加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致.

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5 (FNDC5)

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Subunit Alpha (SCNN1a)

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