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人血液白血病细胞操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,人血液白血病细胞此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:人血液白血病细胞取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 人血液白血病细胞 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。人血液白血病细胞传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1537 短密青霉
XY1538 动物双歧杆菌
XY1539 丁香假单胞菌
XY1540 貂肺上皮细胞,Mv.1.Lu(NBL-7)细胞,
XY1541 地衣芽孢杆菌
XY1542 低转移人肝癌细胞,MHCC97-L细胞,
XY1543 低分化胃腺癌 BGC-823细胞,
XY1544 低分化鼻咽癌细胞系 SUNE-1细胞
XY1545 德式乳杆菌保加利亚亚种
XY1546 德氏乳杆菌乳酸亚种
XY1547 德氏乳杆菌保加利亚亚种
XY1548 岛青霉
XY1549 淡紫灰链霉菌
XY1550 淡天蓝色链霉菌
XY1551 胆囊癌细胞,GBC-SD细胞
XY1552 胆管细胞型肝癌细胞,HCCC-9810细胞
XY1553 单增李斯特氏菌
XY1554 单增李斯特菌
XY1555 单核增生性李斯特氏菌
XY1556 单核增生李斯特菌
XY1557 单核细胞增生李斯特氏菌
XY1558 单核细胞瘤 THP-1细胞,
XY1559 单核细胞白血病)?THP-1细胞
XY1560 单核巨噬细胞白血病)?RAW 264.7细胞
XY1561 袋鼠肾细胞,Pt K1 (NBL-3)细胞,
XY1562 大细胞肺癌细胞,NCI-H661细胞
XY1563 大鼠主动脉血管平滑肌细胞,A10细胞
XY1564 大鼠主动脉平滑肌细胞,RSMC细胞
XY1565 大鼠主动脉内皮细胞,SVAREC细胞
XY1566 大鼠正常肝细胞,BRL3A细胞
XY1567 大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞,AR42J细胞
XY1568 大鼠胰腺癌细胞,DSL-6A/C1细胞
XY1569 大鼠胰岛素细胞,INS-1细胞
XY1570 大鼠血管平滑肌细胞,USMC细胞
XY1571 大鼠雪旺细胞,RSC96细胞,
XY1572 大鼠胸主动脉平滑肌细胞,ATCC:A10 VSMC细胞
XY1573 大鼠胸大动脉平滑肌细胞,A7r5细胞,