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大鼠骨肉瘤操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,大鼠骨肉瘤此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:大鼠骨肉瘤取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 大鼠骨肉瘤 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。大鼠骨肉瘤传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0499 人血管平滑肌 T/G细胞
XY0500 人血管内皮细胞,VE细胞
XY0501 人血管内皮细胞,EC-304细胞
XY0502 人雪旺细胞,HSC细胞
XY0503 人胸腺激酶缺陷性细胞系 143TK细胞
XY0504 人胸膜瘤细胞,SMC-1细胞
XY0505 人星形胶质瘤细胞,U251细胞
XY0506 人小细胞肺癌细胞,NCI-H446细胞,
XY0507 人小细胞肺癌细胞,NCI-H345细胞
XY0508 人小细胞肺癌细胞,LTEP-sm细胞
XY0509 人小细胞肺癌细胞,LTEP-P细胞
XY0510 人小细胞肺癌细胞,DMS153
XY0511 人小细胞肺癌 HS77细胞,
XY0512 人小细胞肺癌 H466细胞
XY0513 人小肠癌细胞,HIC细胞
XY0514 人腺癌细胞,F56细胞
XY0515 人涎腺腺样囊性癌细胞,ACC-3细胞
XY0516 人纤维肉瘤细胞,HT-1080细胞
XY0517 人纤维肉瘤 HT-1080细胞
XY0518 人胃粘膜细胞,GES-1细胞
XY0519 人胃腺癌细胞株 SGC-7901细胞
XY0520 人胃腺癌细胞(低分化) BGC-823细胞
XY0521 人胃腺癌细胞,SGC-7901细胞
XY0522 人胃腺癌细胞,NCI-N87细胞
XY0523 人胃腺癌细胞,MCG803细胞
XY0524 人胃腺癌细胞,Human AGS细胞
XY0525 人胃腺癌细胞,BGC-823细胞
XY0526 人胃腺癌细胞,AGS细胞,
XY0527 人胃上皮细胞,GES-1细胞
XY0528 人胃癌细胞系 MGC-803细胞
XY0529 人胃癌细胞系 HS-746T细胞
XY0530 人胃癌细胞(未分化)HGC-27细胞,
XY0531 人胃癌细胞,SNU-638细胞
XY0532 人胃癌细胞,SGC7901细胞
XY0533 人胃癌细胞,NUGC-3细胞
XY0534 人胃癌细胞,NCI-N87细胞