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正常小鼠睾丸Leydig细胞操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,正常小鼠睾丸Leydig细胞此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:正常小鼠睾丸Leydig细胞取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 正常小鼠睾丸Leydig细胞 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。正常小鼠睾丸Leydig细胞传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0069 杂交瘤细胞抗CD2 35.1细胞
XY0070 杂交瘤细胞抗AChE AE-1细胞,
XY0071 杂交瘤细胞CD25 PC 61 5.3 细胞
XY0072 杂交瘤(抗CD3) OKT3细胞
XY0073 运动发酵单孢菌
XY0074 圆弧青霉
XY0075 原位胰腺腺癌细胞,BxPC-3细胞
XY0076 宇佐美曲霉
XY0077 鼬肺上皮细胞,MV-1-Lu细胞
XY0078 幼仓鼠肾细胞,BHK细胞
XY0079 永生化鼻咽上皮细胞系 NP69-SV40T细胞
XY0080 荧光威克酵母
XY0081 荧光素酶转染人成骨肉瘤细胞,U2OS-Luc teT-on细胞
XY0082 荧光假单胞菌
XY0083 婴儿双歧杆菌
XY0084 隐甲藻
XY0085 阴沟肠杆菌
XY0086 异型酒香酵母
XY0087 已型副伤寒沙门氏菌
XY0088 乙型溶血性链球菌
XY0089 乙酸钙不动杆菌
XY0090 胰腺癌细胞,PANC-1细胞
XY0091 洋葱假单胞菌
XY0092 羊膜细胞,WISH细胞
XY0093 烟酸芽孢杆菌
XY0094 烟曲霉
XY0095 亚利桑那沙门氏菌
XY0096 熏衣草灰链霉菌
XY0097 血细胞瘤细胞系 Ramos细胞
XY0098 叙利亚仓鼠肾细胞,BHK-21细胞
XY0099 许旺酵母变种
XY0100 许旺酵母
XY0101 休哈塔假丝酵母