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两歧双歧杆菌操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,两歧双歧杆菌此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:两歧双歧杆菌取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 两歧双歧杆菌 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。两歧双歧杆菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0763 人胚肾细胞,293 Cells, low passage细胞
XY0764 人胚肾细胞,293 [HEK-293]细胞
XY0765 人胚肾上皮细胞,HKC细胞
XY0766 人胚肾上皮细胞,HK-2C细胞
XY0767 人胚肾上皮包装细胞,GP2-293细胞
XY0768 人胚肾上皮包装细胞,GP2-293Luc细胞
XY0769 人胚肾二倍体细胞,CCC-HEK-1细胞
XY0770 人胚肝细胞正常 QSG-7701细胞
XY0771 人胚肝二倍体细胞,CCC-HEL-1细胞
XY0772 人胚肺细胞,WI-38细胞
XY0773 人胚肺细胞,MRC-5细胞,
XY0774 人胚肺二倍体细胞,HLF-02细胞
XY0775 人胚肺成纤维细胞突变癌细胞,Z-HL16C细胞
XY0776 人胚肺成纤维细胞,WI-38细胞
XY0777 人胚肺成纤维细胞,MRC-5细胞
XY0778 人胚肺成纤维细胞,MRC-5-EGFP+puro细胞
XY0779 人胚肺成纤维细胞,HLF细胞
XY0780 人胚肺成纤维细胞,HFL-I细胞
XY0781 人胚肺成纤维细胞,HFL1细胞
XY0782 人胚肺成纤维细胞,HELF细胞
XY0783 人胚肺成纤维细胞,CCC-HPF-1细胞
XY0784 人脑星形胶质母细胞瘤细胞,U-87MG细胞
XY0785 人脑星形胶质母细胞瘤 U-87MG-EGFP细胞
XY0786 人脑星形胶质母细胞瘤 U-118 MG细胞
XY0787 人脑星形胶质瘤细胞,U251细胞,
XY0788 人脑神经胶质瘤细胞(H4) H4细胞
XY0789 人脑神经胶质瘤细胞,U-373MG-EGFP细胞
XY0790 人脑瘤细胞,SF767细胞
XY0791 人脑瘤细胞,SF17细胞
XY0792 人脑瘤细胞,SF126细胞
XY0793 人脑胶质细胞株(正常)HEB细胞
XY0794 人脑胶质细胞株 HEB细胞
XY0795 人脑胶质母细胞瘤细胞,TG-905细胞
XY0796 人脑胶质母细胞瘤细胞,SW038-C2细胞
XY0797 人脑胶质瘤细胞系 U373细胞
XY0798 人脑多形性胶质瘤细胞,BT-325细胞
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