肺炎链球菌操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，肺炎链球菌此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：肺炎链球菌取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 肺炎链球菌 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。肺炎链球菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。 

XY0069 杂交瘤细胞抗CD2 35.1细胞

XY0070 杂交瘤细胞抗AChE AE-1细胞,

XY0071 杂交瘤细胞CD25 PC 61 5.3 细胞

XY0072 杂交瘤(抗CD3) OKT3细胞

XY0073 运动发酵单孢菌

XY0074 圆弧青霉

XY0075 原位胰腺腺癌细胞,BxPC-3细胞

XY0076 宇佐美曲霉

XY0077 鼬肺上皮细胞,MV-1-Lu细胞

XY0078 幼仓鼠肾细胞,BHK细胞

XY0079 永生化鼻咽上皮细胞系 NP69-SV40T细胞

XY0080 荧光威克酵母

XY0081 荧光素酶转染人成骨肉瘤细胞,U2OS-Luc teT-on细胞

XY0082 荧光假单胞菌

XY0083 婴儿双歧杆菌

XY0084 隐甲藻

XY0085 阴沟肠杆菌

XY0086 异型酒香酵母

XY0087 已型副伤寒沙门氏菌

XY0088 乙型溶血性链球菌

XY0089 乙酸钙不动杆菌

XY0090 胰腺癌细胞,PANC-1细胞

XY0091 洋葱假单胞菌

XY0092 羊膜细胞,WISH细胞

XY0093 烟酸芽孢杆菌

XY0094 烟曲霉

XY0095 亚利桑那沙门氏菌

XY0096 熏衣草灰链霉菌

XY0097 血细胞瘤细胞系 Ramos细胞

XY0098 叙利亚仓鼠肾细胞,BHK-21细胞

XY0099 许旺酵母变种

XY0100 许旺酵母

XY0101 休哈塔假丝酵母

XY0102 胸膜细胞瘤) SMC-1细胞

XY0103 新生牛眼晶体上皮细胞,NBLE细胞